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HeLa細胞分裂期における微小管再構築のcdc2キナーゼによる制御

CDC2 激酶对 HeLa 细胞分裂过程中微管重塑的调节

基本信息

批准号：
05152048
负责人：
久永眞市
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152048/
关键词：
HeLa細胞細胞分裂がん cdc2キナーゼサイクリン微小管リン酸化

项目摘要

cdc2キナーゼ(p34^<cdc2>とサイクリンBの複合体)は分裂中期促進因子(MPF)の本体で、M期に活性化されるセリン/スレオニンキナーゼ活性をもつ。cdc2キナーゼはM期に際して、染色体凝縮、核膜崩壊、分裂装置の形成など様々なM期の事象を引起す。本研究では微小管との関連に注目し、HeLa細胞を用いて(1)cdc2キナーゼが紡錘体に集積する仕組みと(2)cdc2キナーゼによる微小管ダイナミクスの制御機構について研究を行った。その結果(1)については、cdc2キナーゼはHeLa細胞の主要な微小管結合蛋白質であるMAP4のPro-rich部位を介して微小管と結合していること、そして、その結合はサイクリンBが担っていること等がin vitroの共沈実験及びGST-サイクリンBを用いた実験から示された。この結果は抗MAP4,抗サイクリンB抗体を用いた培養細胞の蛍光染色から、in vivoでも確認された。cdc2キナーゼは微小管脱重合試薬であるノコダゾールによる処理や、界面活性剤処理に対してMAP4と同じ挙動を示した。(2)については、cdc2キナーゼはMAP4をリン酸化できること、リン酸化されたMAP4は微小管安定化能が低下しており、それは微小管の脱重合相を重合相へと変換させるrescue頻度の減少によるものであることが示された。cdc2キナーゼと微小管との結合様式が明らかにされたこと、及び、MAP4の微小管ダイナミクスにおける役割や、リン酸化の影響についての結果も初めてのものである。しかし、in vivoでのリン酸化についてはまだ明かでない点も残されており、今後はin vivoでの役割に留意して研究を進めていきたいと考えている。

cdc2 (p34^<cdc2>cdc2 is the cause of M phase events such as chromosome condensation, nuclear membrane collapse, and fission apparatus formation. In this study, we focused on the relationship between microtubule and HeLa cells, and studied the mechanism of microtubule regulation in (1) cdc2-based spindle aggregation and (2) cdc2-based spindle aggregation. The results are as follows: (1) The main microtube-binding protein of HeLa cells is expressed in the Pro-rich site of MAP4, which is expressed in the microtube-binding protein of cdc2, and in the GST-binding protein of GST-binding protein B. The results were confirmed by light staining of cultured cells with anti-MAP 4 and anti-Sericin B antibodies in vivo. cdc2 microtube debonding test, interface activation test, MAP4 microtube debonding test (2)The stability of micro-tubes is low, and the frequency of rescue is reduced. cdc2 In the future, we will continue to pay attention to the research of in vivo.