遺伝子操作マウスからのin vivoパッチクランプ記録法の確立

基因工程小鼠体内膜片钳记录方法的建立

• 批准号: 14658268
• 负责人: 吉村 恵
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658268/
• 关键词: in vovoパッチクランプ; 脊髄後角; 痛み; 遺伝子操作; ノックアウト; EPSC; IPSC; シナプス応答; in vivoパッチクランプ; 感覚受容体; ノックアウトマウス; 痛覚; 膠様質; カプサイシン受容体

末梢から伝えられた感覚情報は、脊髄後角において修飾・統合され、視床を介して大脳皮質第一次感覚野に運ばれ、知覚される。最近の痛み関連分子のクローニングに伴い、行動薬理学的な手法を用いて責任分子の機能的な役割が追求されてきたが、分子のレベルから行動学的な変化を推測・説明する事は困難であることは論を待たない。そこで、分子と行動学的変化との関連を、より高い確実性を持って説明するためには、in vivoでの単一細胞からの電気生理学的な解析が必須となる。本研究は、遺伝子操作を受けたマウス脊髄後角細胞におけるシナプス応答の解析を可能にする事を目的とする。麻酔下にマウスの気管切開を行い、動脈圧および体温のモニターを行う。腰部脊髄の椎弓切除を行った後、脊髄・脳固定装置にセットする。脊髄表面は加温したクレブス液によって持続的に灌流し、薬液も同じ経路から直接脊髄に投与する。膠様質表面のくも膜と軟膜に電極刺入用の窓を開ける。記録細胞が膠様質である同定には、記録細胞の脊髄表面からの深さと、記録電極からneurobiotinを注入し、その形態と部位から行う。膠様質細胞からパッチクランプ記録を行うと、ラットからの記録と同様に、微少興奮性シナプス応答(mEPSC)が記録できた。膜電位を0mVにすると、微少抑制性シナプス応答(mIPSC)が記録できた。記録と同側の後肢を鈎付きのピンセットで挟むと、高頻度、高振幅のEPSCが観察された。一方、触刺激によっては刺激のはじめと終わりにEPSCが観察されたが、応答は速い慣現象を示した。これらの応答はラット膠様質細胞で観察されたものと同様、グルタミン酸受容体拮抗薬で抑制された。今後、痛み関連分子をノックアウトしたマウスから記録を行い、どのようなシナプス応答の変化が惹起されているかを明らかにしていく。

The sensory information of the distal part of the brain, the posterior horn of the spine, the integration, the visual bed, the first sensory field, and the cognitive field Recent studies on molecular dynamics, molecular dynamics, and behavioral dynamics have shown that molecular dynamics are difficult to predict and explain. The relationship between molecular kinetics and electrophysiology must be explained with high accuracy. The purpose of this study is to make it possible to analyze the expression of synapses in posterior horn cells of the spinal cord that are subject to gene manipulation. Under anesthesia, the blood vessels are cut open, and the blood pressure and body temperature are cut open. Lumbar spine and vertebral arch resection, spine fixation device The surface of the spine is heated, the fluid is maintained, and the fluid is administered directly to the spine The adhesive film on the surface and the soft film on the surface of the adhesive film are used for electrode penetration. Record cell gel quality, record cell ridge surface, record electrode neurobiotin injection, record cell morphology and location. The collagen cells were recorded in the same way and with little excitability (mEPSC). The membrane potential is 0mV, and there is little inhibition of the response (mIPSC). Record the ipsilateral side of the hind limb and the high frequency, high amplitude of the EPSC. A side, touch stimulation, stimulation and end, EPSC detection, response and speed of the phenomenon This is the first time that a cell has been identified as a receptor antagonist. In the future, the pain related molecules will be recorded in the middle of the process, and the changes in the process will be caused in the middle of the process.

项目成果

吉村 恵 et al.: "骨粗鬆症の痛みの発生とカルシトニンによる静痛作用"Clinical Calcium. 11・9. 1153-1157 (2002)

Megumi Yoshimura 等：“骨质疏松性疼痛的发生和降钙素的镇痛作用”临床钙 11・9（2002）。

吉村 恵 et al.: "脊髄スライスおよびin vivoパッチクランプ法を用いた脊髄後角における痛覚伝達系の機能解析"麻酔. 51. S79-S88 (2002)

Megumi Yoshimura 等人：“使用脊髓切片和体内膜片钳技术对脊髓背角疼痛传递系统进行功能分析”51。S79-S88 (2002)。

Jiang N: "Somatostatin directly inhibits substantia gelatinosa neurons in adult rat spinal dorsal horn in vitro."Neuroscience Research. 47. 97-107 (2003)

江宁：“生长抑素在体外直接抑制成年大鼠脊髓背角胶质神经元。”神经科学研究。

Katafuchi T: "Prolonged effects of polyriboinosinic : polyribocytidylic acid on spontaneous running wheel activity and brain Interferon-α mRNA in rats : A model for immunologically induced fatigue."Neuroscience. 120. 837-845 (2003)

Katafuchi T：“聚核糖肌苷：聚核糖胞苷酸对大鼠自发跑轮活动和大脑干扰素 α mRNA 的长期影响：免疫诱导疲劳模型。”神经科学。 120. 837-845 (2003)

古江 秀昌: "およびラット脊髄後角細胞からのin vivoパッチクランプ記録法"日本生理学雑誌. 65・10. 315-321 (2003)

Hidemasa Furue：“大鼠脊髓背角细胞的体内膜片钳记录方法”日本生理学杂志65・10（2003）。