ガングリオシドのみを水解する形質膜シアリダーゼの構造と機能の研究

仅水解神经节苷脂的质膜唾液酸酶的结构和功能研究

基本信息

  • 批准号:
    04680152
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.96万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1992
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1992 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

われわれは、これまでラット脳や肝を材料として、基質特異性や細胞内局在を異にし、免疫学的にも区別される4種のシアリダーゼ(リソゾーム内腔性、細胞質性、リソゾーム膜性、形質膜性シアリダーゼ)の存在とその性状を明らかにしてきた。本課題では、これらのうち、細胞表層にあってガングリオシドの修飾に与かることが予想される形質膜シアリダーゼに着目して研究を進めた。構造や機能の解析を目的として、酵素蛋白の完全精製を試みる一方、生理的あるいは病的変化に伴う活性変動した調査した。ラット腹腔マクロファージをOK-432で活性化すると、形質膜シアリダーゼ活性は3〜5日後には約8倍に上昇し、9日後には刺激前に戻った。それは表層抗原アシアロGM1の発現と平行していた。また、このシアリダーゼは、マウス表皮由来JB6細胞の悪性形質転換によって活性上昇することもわかった。ラット脳形質膜シアリダーゼと完全に免疫学的に交叉するウシ脳酵酵素の高度精製を試みた。ウシ脳ではシナプトソーム膜に局在することを確認したが、大量精製を目的としたため、ウシ脳顆粒画分を出発材料とした。トリトンX-100とデオキシコール酸で可溶化後、DE-52、オクチルセファロース、ヘパリン-セファロース、セファクリルS-200、RCA-アガロース、モノQ、スーパーローズ12のカラムクロマトグラフィーをつないで、顆粒画分から20000倍以上の精製標品を得た。電気泳動やゲル濾過、蔗糖密度勾配遠心によって分子量の算定を行っているが、それぞれの値が異なり、真の分子量の決定を急いでいる。また、この精製標品は、ほとんどガングリオシドのみに作用するが、α2→3≧α2→8>α2→6シアリル結合の順に水解した。この酵素がガラクトース残基を有する糖タンパクであることもわかった。精製標品を用いてペプチドシークエンスへと進めたい。
In this study, the liver materials were tested, and the cytosolic and immunological characteristics of the liver materials were significantly different in the four types of liver diseases (endoluminal, cellular, membranous, membranous, membranous and membranous). In this project, we need to know how to improve the quality of the membrane in order to improve the research. The machine can be used to analyze the purpose and enzyme protein in the complete purification test, the chemical reaction of the physiological disease associated with the activity of the disease. After 3-5 days, the activity of OK-432 was about 8 times higher than that of the abdominal cavity and 9 days after stimulation. The antigens were expressed in parallel and GM1 was detected. The origin of the epidermis, the shape of the JB6, the activity of the epidermis, the origin of the epidermis. The cross-sectional enzyme test of complete immunology was carried out in a highly refined manner. Please tell me that the film office is in charge of confirming that there is a lot of information about the material. After the acid has been dissolved, DE-52, RCA-, 200, 100, 12, 10, 10, 10, 12, 10, 12, 10, 12, 12, 12, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100, 100 The concentration of sucrose was determined by electrophoresis, the molecular weight of sucrose was calculated, the molecular weight was determined, and the molecular weight was determined by the determination of molecular weight. The combination of α 2'3'α 2'8g t, α 2'6', α 2'6', α 2'3', α 2', α 2', α 2', α, and α, respectively. There are some enzymes in the residue, sugar, sugar and sugar. The fine standard product is used to improve the quality of the product.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
宮城 妙子: "ガングリオシド研究法" 鈴木 康夫.安藤 進 編集, (1993)
宫城妙子:《神经节苷脂研究方法》铃木康夫、安藤进主编,(1993)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Taeko Miyagi: "Differential effect of various inhibitors on four types of rat sialidese" Glycoconjugate J.(1993)
Taeko Miyagi:“各种抑制剂对四种大鼠唾液酸酶的不同作用”Glycoconjugate J.(1993)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Taeko Miyagi: "Multiple forms of mammalian sialidases:altered expression in carcinogenesis." Tohoku J.Exp Med.(1992)
Taeko Miyagi:“哺乳动物唾液酸酶的多种形式:致癌过程中表达的改变。”
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  • 发表时间:
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  • 通讯作者:
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