rho遺伝子産物の標的分子と伝達シグナルの解明

rho基因产物的靶分子和转导信号的阐明

• 批准号: 06670107
• 负责人: 森井 成人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670107/
• 关键词: rho遺伝子産物; 低分子量GTP結合蛋白質; 蛋白質キナーゼ; チロシンリン酸化; 細胞接着; 細胞骨格

1.rho遺伝子産物(rho p21)の蛋白質チロシンリン酸化における役割:線維芽細胞でbombesin,endothelin刺激により惹起されるfocal adhesion kinase(p125FAK)およびpaxillinのチロシンリン酸化が、C3酵素によるrho p21の不活化によって特異的に抑制された。またC3酵素処理細胞では上記刺激後の細胞接着斑のチロシンリン酸化の亢進とストレス線維の形成が阻害された。これよりrho p21が蛋白質チロシンリン酸化調節を介して細胞接着・細胞骨格形成を制御している可能性が示唆された。2.renaturation kinase assayを用いてrho p21の下流で活性化されるキナーゼの同定:lysophosphatidate(LPA)で刺激した細胞では、PVDF膜上で分子量145K,85K,64K,60K,43KのSer/Thrキナーゼの自己リン酸化の増強が観察された。これらのうち、分子量43KのキナーゼはGiを介して活性化され、MAPキナーゼであること、一方、60K,64K,85K,145KのキナーゼはGqおよびrho p21の下流で活性化されることが明らかになった。本研究の結果からrho p21を介して制御されるキナーゼカスケードの存在が示唆された。3.[^<35>S]γGTP・rho p21をプローブに用いたligand overlay法およびrho p21をbaitとしてtwo hybrid法を用いてrho p21の標的分子の検出を試みた。前者の方法によりGTP・rho p21と特異的に結合する分子量165Kの蛋白質が得られ、また後者の方法ではrho p21と反応する3つの異なる遺伝子が得られた。現在これらの同定を進めている。

1. Protein acidification of rho gene product (rho p21): bombesin and endothelin stimulation of fibroblasts and focal adhesion. Kinase(p125FAK) is a non-acidified paxillin, C3 enzyme is inactivated by p21, and a specific inhibitor is inhibited. Cells treated with C3 enzyme can increase the acidification of cell adhesion spots after stimulation and inhibit the formation of line dimensions.これよりrho p21がProtein チロシンリン acidification regulates をmediated してCell follow-up and cell lattice formation をcontrol している possibility がshows instigation された. 2.renaturation kinase assayいてrho p21 downstream activation and activation: lysophosphatidate (LPA) stimulates cells, PVD The molecular weights on the F membrane are 145K, 85K, 64K, 60K, and 43K.これらのうち、Molecular weight 43KのキナーゼはGiを Introduction してActivated され、MAPキナーゼであること、一方、60K,64K,85K,145KのキナーゼはGqおよびrho p21's downstream activation is activated. The results of this study are based on the results of this study. 3.[^<35>S]γGTP・rho p21をプローブに用いたligand overlay method およびrho p21をbaitとしてtwo hybrid method を用いてrho The target molecule of p21 is の検出みた. The former method is GTP・rho p21 and the specific binding method is a protein with a molecular weight of 165K, and the latter method is rho p21と濜する3つのdifferentなる伝子が得られた. Now it's the same as it is now.

项目成果

Morii,N.: "Preparation of native and recombinant botulinum C3 ADP-ribosyltransferase and identification of rho proteins by ADP-ribosylation." Methods in Enzymology:Small GTPases and their regulators. (印刷中). (1995)

Morii, N.：“天然和重组肉毒杆菌 C3 ADP-核糖基转移酶的制备以及通过 ADP-核糖基化鉴定 rho 蛋白。”酶学方法：小型 GTP 酶及其调节剂（出版中）。

Rankin,S: "Botulinum C3 exoenzyme blocks the tyrosine phosphorylation of p125FAK and paxillin induced by bombesin and endothelin." FEBS Lett.354. 315-319 (1994)

Rankin,S：“肉毒杆菌 C3 外切酶可阻断铃蟾肽和内皮素诱导的 p125FAK 和桩蛋白的酪氨酸磷酸化。”