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血液細胞系譜に特異的なc-kit遺伝子の発現調節

血细胞谱系特异性 c-kit 基因表达的调节

基本信息

批准号：
06670359
负责人：
林眞一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670359/
关键词：
c-kit 血液幹細胞エンハンサー転写調節 F9細胞 Wマウス Steel factor レチノイン酸

项目摘要

血液細胞系譜の発生において、最も初期に発現が確認される受容体チロシンキナーゼc-kitの遺伝子発現を、レチノイン酸とcAMPで誘導できる胚性奇形癌腫F9細胞を用いてc-kit遺伝子の転写調節領域を検索した。EMBL3マウスゲノミックライブラリーよりc-kit遺伝子第1エクソン5'上流20kbから第21エクソン3'下流10kb間約120kbを回収し、pCATbasic(エンハンサー、プロモーターなし)ベクターに各ファージ内に挿入されていた断片をc-kit遺伝子の5'プロモーターを含む2.7kbの領域(pCATb-kit-NS6)の上流につなぎ、各断片のCAT活性を検討した。22断片の中で第9イントロンから第13イントロンを含む断片(pCATb-kit-NS6-K111)にF9細胞をレチノイン酸とcAMPで刺激した際に活性が出現することを確認した。この活性を検出するには3-4日の持続した刺激を必要とした。制限酵素を用いてK111を3'側より削っていくと、第9イントロン内のSacI-ApaI断片(SA4、573bp)と第13イントロン内のXhoI-KpnI断片(XK1、268bp)が欠落するとCAT活性が激減した。各々の断片内にはc-Myb,b-HLH-Zip(M-box),Ets,AP-1とGATA,Ets,C/EBP,c-Myb,b-HLH-Zipの結合コンセンサス配列がみられたが、レチノイン酸反応性領域配列は検出されなかった。SA4、XK1、SA4-XK1各断片をpCAT-kit-NS6ベクターに組み込むと夫々弱いながらもCAT活性を示した。さらに、タンデムにXK1断片を3つ挿入するとその活性は上昇した。以上のことからXK1断片には転写調節配列が存在すると考えられその制御配列を明らかにするための検索を行っている。この領域ではc-kit陽性のマスト細胞腫P815ではCAT活性は認められなかった。すべてのc-kit陽性細胞がCAT活性を示すのではないので、F9細胞で見いだした領域が、どの細胞系譜の発現調節を司るのか検討している。最近、c-kitの発現異常マウスW^<sh>,W^<pen>,W^<57>の遺伝子変異が5'上流数100kbに確認され、この領域にもc-kit遺伝子の制御領域が存在することが示唆されているので、各領域の機能について検討してみたい。

The development of the blood cell pedigree, early detection, identification of receptor genes, expression of c-kit genes, and induction of cAMP and cAMP in embryogenic carcinoma F9 cells were investigated. EMBL3 contains c-kit gene fragment 5'upstream 20kb and c-kit gene fragment 5' downstream 10kb. CAT activity of pCATbasic(pCATb-kit-NS6) fragment 5 'upstream and c-kit gene fragment 5' downstream 120kb was detected. It was confirmed that F9 cells were activated by acid and cAMP stimulation at the 9 th and 13 th segments of pCATb-kit-NS6-K111. This activity is necessary for 3-4 days of continuous stimulation. The CAT activity of the restriction enzyme K111 in the 3'-side region, SacI-ApaI fragment (SA4, 573bp) in the 9th region, and XhoI-KpnI fragment (XK1, 268bp) in the 13th region was decreased. C-Myb,b-HLH-Zip(M-box),Ets,AP-1, GATA,Ets,C/EBP,c-Myb,b-HLH-Zip are combined in each fragment. SA4, XK1 and SA4-XK1 fragments were pCAT-kit-NS6, which showed CAT activity. The activity of XK1 increased when it was released. The above is a description of the XK1 fragment. C-kit positive cells P815 CAT activity The expression of CAT activity in c-kit-positive cells, F9 cells, and the regulation of cell lineage development are discussed. Recently, c-kit discovery anomaly W^<sh>,W^<pen>,W^<57>has been confirmed to be 5'upstream 100kb, and c-kit discovery domain control domain exists in this domain.