幹細胞から成熟血液細胞への分化の全過程解析法

一种分析干细胞向成熟血细胞分化全过程的方法

• 批准号: 10181217
• 负责人: 林 眞一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181217/
• 关键词: ES細胞; 血液幹細胞; 破骨細胞; ストロマ細胞; c-Kit; c-Fms; GATA-2; ODF; OPGL

1個の胚性幹(ES)細胞をストロマ細胞株ST2上にまいて、移しかえるといった操作無しに破骨細胞誘導のすべての過程を1個のコロニーの中で継続的に観察できる(1段階培養法)。c-Kit、c-Fms、β2-integrin等の血液細胞表面マーカーで検討すると培養4日目にはc-Kil陽性細胞が出現し、6日目にはc-Fms、β2-integrin陽性細胞がコロニーの中心に出現し、次第に辺縁に移動する。そして8日目に辺縁にのみ破骨細胞のマーカーである酒石酸抵抗性酸フォスファターゼ陽性細胞が検出された。一方、血管内皮系譜の細胞はFlk-1、CD31は4日目には既に発現しその後放射線状にコロニーの成長に従いシート上に増大した。血液細胞は次第に辺縁部に集積し成熟破骨細胞へと分化した。この培養系を用いることで血液細胞系譜の分化過程を二次元的に理解できる。この培養法に加え、培養条件を途中で変化させることで血液細胞系譜までの分化、未熟血液細胞の増殖、その後の成熟過程を分離して観察できる(2及び3段階培養法)。3種の培養系を用いてtal-1、GATA-1、GATA-2、FOG遺伝子破壊ES細胞から破骨細胞誘導を行ったところ、GATA-1(-1-)、FOG(-1-)ES細胞は正常と同様に誘導が行えた。tal-1(-1-)ES細胞からは破骨細胞を含む如何なる血液細胞系譜も誘導できなかった。GATA-2(-1-)ES細胞からは頻度は激減していたが一旦、破骨細胞系譜にコミットした前駆細胞は正常と同じように増殖し分化した。このことはGATA-2がES細胞の血液細胞系譜への分化決定に関与していること、しかしながらその後の破骨細胞系譜の分化には関与していないことを示している。さらに抗M-CSF受容体阻害抗体、破骨細胞分化因子(ODF/OPGL)の阻害因子OCIFを培養に加えることでtal-1-->GATA-2-->M-CSF-->ODF/OPGLの順に破骨細胞分化に影響を与えることが明らかになった。

One embryonic embryo (ES) cell line ST2 was used to detect and transfer embryos on the cell line. The broken bone cells were used to guide the detection of the embryos in one embryo cycle (1-stage culture method). C-Kit, c-Fms, β 2-integrin and other blood cells were detected on the surface of c-Kil cells on the 4th day, c-Fms on the 6th day, β 2-integrin cells on the 6th day, and then on the 4th day. On the 8th, the broken bone cell was broken and the tartaric acid resistant acid was found to be resistant to tartaric acid. On the one hand, the vascular endothelial cell Flk-1, CD31 on the 4th, both radiate and grow in the form of radiation after the onset of stress. The blood cells were divided into mature osteoclast cells and differentiation cells. The purpose of this study is to understand the two-dimensional process of the differentiation of blood cells. During the incubation process, the differentiation of blood cell lines, the proliferation of immature blood cells, and the maturation process of immature blood were observed. (2 and 3-stage incubation methods). 3. Using tal-1, GATA-1, GATA-2 and FOG to break ES cells and bone cells to guide the growth of ES cells, GATA-1 (- 1 -) and FOG (- 1 -) ES cells. Tal-1 (- 1 -) ES cells contain information about how to treat blood cells. GATA-2 (- 1 -) ES

项目成果

T.Kunisada,et al.: "Murine cutaneous mastocytosis and epidermal melanocytosis induced by keratinocyte expression of transgenic stem cell factor." J.Exp.Med.187・10. 1565-1573 (1998)

T. Kunisada 等人：“转基因干细胞因子的角质形成细胞表达诱导的小鼠皮肤肥大细胞增多症和表皮黑素细胞增多症”。J.Exp.Med.187·10（1998）。

H.Yamazaki,et al.: "Tooth-specific expression by the regulatory sequences of rat dentin sialoprotein 2 gene in transgenic mice." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1999)

H.Yamazaki 等人：“转基因小鼠中大鼠牙本质唾液蛋白 2 基因调控序列的牙齿特异性表达”。

Y.Tanio,et al.: "CD9 molecule expressed on stromal cells is involved in osteoclastogenesis." Exp.Hematol.(in press). (1999)

Y.Tanio 等人：“基质细胞上表达的 CD9 分子参与破骨细胞生成。”

A.Miyamoto,et al.: "Establishment and characterization of pro-B cell lines from motheaten mutant mouse defective in SHP-1 protein tyrosine phosphatase." Immunol.letters. 63・2. 75-82 (1998)

A.Miyamoto 等人：“SHP-1 蛋白酪氨酸磷酸酶缺陷小鼠的 pro-B 细胞系的建立和表征。”Immunol.letters 63·2。