ジーントラップ法による未分化胚幹細胞の血液幹細胞への分化関連遺伝子の解析

基因陷阱法分析未分化胚胎干细胞分化为造血干细胞的相关基因

• 批准号: 06670369
• 负责人: 末松 佐知子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670369/
• 关键词: ジーントラップ; ES細胞; 血液幹細胞; 細胞分化; 増殖因子; クローニング; bZIP

ジーントラップ法を用いて、ES細胞分化に関連する未知遺伝子の単離を試みた。En-2イントロンの下流にスプライシング受容シグナル、IRESシグナル及びLacZを配置、その後pBR322ベクタープラスミドを結合、下流にはアクチンプロモーター及びネオマイシン耐性遺伝子を挿入し、ベクターを完成させた。ES細胞株D3及びE14-1にベクターを電気穿孔法により導入し、ネオマイシン耐性コロニー約4、000個を選別した。選別クローンを分化誘導因子であるレチノイン酸下で48時間培養後X-gal染色を行ない強陽性のクローンを選別、5'RACE法を用いてRNAよりcDNAを同定し、未知のクローンに対する全長cDNAをD3細胞株より得たcDNAライブラリーから同定、塩基配列を決定した。うち1つはbZIPモチーフを有する未知の転写因子であることが判明した。一方、別の系としてクローンをC57/BL6マウスの大腿骨髄から得た線維芽細胞上にて10日間培養後X-gal染色を行った。陽性細胞を選別後、それぞれのcDNAライブラリーを作製しクローンを同定、現在10種類のcDNAの塩基配列を解析中である。さらに、ES細胞を血球系細胞へ分化させる系として、op/opマウス骨髄線維芽細胞株OP-9を支持細胞としてES細胞を分化させ得ることが報告されており、現在このシステム上でX-gal染色陽性になるクローンの選別を行なっている。

The method of differentiation and differentiation of ES cells was used in the study. In addition, the downstream of the engine is configured with IRES and LacZ, and the downstream of the engine is configured with pBR322. The downstream of the engine is configured with IRES and LacZ. The downstream of the engine is configured with IRES and LacZ. The downstream of the engine is configured with IRES and LacZ. The downstream of the engine is configured with IRES and LacZ. ES cell lines D3 and E14-1 were selected by electroporation for induction, reproduction and tolerance. Selection of differentiation inducing factors X-gal staining after 48 hours of culture in acid was used to determine RNA cDNA identity, unknown cDNA identity and gene alignment in D3 cell line. 1. Unknowns about writing factors. X-gal staining was performed on the cell line of the thigh bone after 10 days of culture. After the positive cell selection, the cDNA sequence of all kinds was determined, and the cDNA sequence of 10 kinds was analyzed. In addition, ES cells were differentiated into hematopoietic cells, and the cell line OP-9 was differentiated into ES cells.