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新しく発見した生体膜リン脂質の構成脂肪酸決定機構に関する研究

新发现的生物膜磷脂组成脂肪酸测定机制研究

基本信息

批准号：
06672201
负责人：
和久敬蔵
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.我々は、従来から知られているアシルCoAシンテターゼとは全く異なるアシルCoAの生成酵素系をラット肝ミクロソームに見いだし、この酵素系の性状を検討した。この酵素系は遊離脂肪酸を基質とせず、膜リン脂質にエステル化した脂肪酸を直接基質とし、反応にATP等のエネルギーを必要としなかった。このATP-independent、CoA-dependentなアシルCoA生成系のCoAに対するKm値は100μM、Vmax値は20nmol/30min/mg proteinであり、この酵素系が生体内でアシルCoA生成に十分働きうることが考えられた。この酵素系はホスファチジルイノシトール(PI)を最も良い基質とし、次いでホスファチジルコリン(PC)、ホスファチジルエタノールアミン(PE)の順で基質となることを明らかにした。また、アラキドン酸を2位に多く有するプラスマローゲン、アルキル型リン脂質は基質となりえなかった。2.本酵素系が脂肪酸の脂肪鎖の延長、不飽和化に重要な役割を担っていることを明らかにした。脂肪酸修飾において従来考えられてきたホスホリパーゼA、アシルCoAシンテターゼによるアシルCoA生成の関与は低いことを示した。このことにより我々の提唱した本酵素の意義を証明できると考えられる。また、膜リン脂質の修飾により膜の流動性の変化等にも関与することが予想された。3.ラット肝細胞を用いて上記酵素系の細胞内分布を検討した。大部分の活性はミクロソーム画分に存在したが、核にも本酵素の活性が存在することを見いだし、この酵素系の新たな役割が考えられた。4.アシルCoA結合蛋白が本酵素系を見かけ上活性化することを見いだし、本酵素系の生理的な活性調節を明らかにした。5.本酵素系のミクロソームからの可溶化に成功した。更にハイドロキシアパタイト、レッドトヨパール、CoA-アフィニティークロマトグラフィー等を用いて精製を強力に推し進めつつある。

1. We have been studying the characteristics of CoA production enzyme system in China since 1990. The enzyme is essential for the production of free fatty acid matrix, membrane lipid matrix and ATP matrix. The Km value of ATP-independent and CoA-dependent CoA production system is 100μM and the Vmax value is 20nmol/30min/mg protein. This protein is the most important element in the matrix, and the second is the matrix (PC), and the third is the matrix (PE). 2-bit acid 2. This enzyme plays an important role in the elongation and unsaturation of fatty acids. Fatty acid modification is A key factor in the formation of fatty acid. The meaning of this enzyme is proved by the examination of the enzyme. The modification of membrane lipids, the fluidity of membranes, etc., are related to this. 3. To investigate the intracellular distribution of enzymes in liver cells. Most of the activities of these enzymes are present in the enzyme system, and the activity of these enzymes is present in the enzyme system. 4. CoA-binding protein is involved in the activation of this enzyme system and the regulation of physiological activity of this enzyme system 5. The enzyme system was successfully solubilized. More information about the use of refined, high-quality products, such as CoA, etc.