新しいイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白の構造と機能に関する研究

新型肌醇1,4,5-三磷酸结合蛋白的结构与功能研究

• 批准号: 06680590
• 负责人: 平田 雅人
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680590/
• 关键词: Ins(1,4,5)P_3; Ins(1,4,5)P_3結合蛋白; 結合ドメイン

D‐ミオ‐イノシトール1,4,5‐三リン酸(Ins(1,4,5)P_3)は細胞内小胞体の含有するCa^<2+>を放出させるセカンドメッセンジャーである。我々は分子サイズが130kと85kの新規のIns(1,4,5)P_3結合蛋白を精製し、それぞれの部分アミノ酸配列を決定した。その結果から、85kDaの分子はホスホリパーゼC(PLC)のδ1型アイソザイムであり、一方130kDa分子は新しいものであることを明らかにした。本研究では、1.85kDa分子(PLC‐δ1)のIns(1,4,5)P_3結合ドメインの構造解明、また、2.新しい130kDa分子の遺伝子クローニングとIns(1,4,5)P_3結合ドメインの構造解明に関し研究を推進した。1.PLC‐δ1遺伝子を発現ベクターにサブクローニングし大腸菌に発現させた。また、PLC‐δ1遺伝子のいろいろな部位を欠失させたミュータントも発現ベクターにサブクローニングし大腸菌に発現させる実験も行った。これらの研究からIns(1,4,5)P_3結合領域はN末端から60番目までに存在することが分かった。N末端から60番目までのうち30〜43番目のアミノ酸配列が特に結合活性を担っているのではないかと考え、この部分のペプチドを合成してIns(1,4,5)P_3結合実験、抗ペプチド抗体による結合抑制実験等を行った。これらの研究からPLC‐δ1におけるIns(1,4,5)P_3結合領域を解明した。2.新規の130kDa分子の遺伝子クローニングに成功し、全アミノ酸配列を決定した。精製蛋白分子で明らかにした数種のペプチド配列を含んでおり、得られたクローンは確かなものであることが分かった。遺伝子データベースによりホモロジー検索をしても、同一のものはなく、新規のIns(1,4,5)P_3結合分子であることが確実となった。

D-ミオ-イノシトール1,4,5-trilinic acid (Ins(1,4,5)P_3) fine The small cell body inside the cell contains Ca^<2+> and releases CaCl. I 々はmoleculesサイズが130kと85kの新guiのIns(1,4,5)P_3 binding proteinをrefinedし,それぞれのpartial アミノacid alignmentをdeterminationした.そのRESULTSから、85kDaのmolecule はホスホリパーゼC(PLC)のδ1 type アイソザイムであり、One side 130kDa molecule は新しいものであることを明らかにした. In this study, the structure of the Ins(1,4,5)P_3-binding Ins(1,4,5)P_3 binding compound of 1.85kDa molecule (PLC-δ1) was elucidated, and 2. New Research on the unraveling of the structure of the 130kDa molecule の伝子クローニングとIns(1,4,5)P_3 combined with ドメインの is advancing. 1.PLC-δ1 缝子を発现ベクターにサブクローニングし coliform に発appears させた.また、PLC-δ1缝子のいろいろなpartsを不了させたミュータントも発appears ベクターにサブクローニングし coliform に発appears させる実験も行った.これらの Research からIns(1,4,5)P_3 Binding Area はN Terminal から60号目までにExistence することが分かった. N-terminal から60片までのうち30~43rd line acid ligation series が特にbinding activity を聣ているのではないかと卡え、こPart of the company's synthetic してIns(1,4,5)P_3 binding system, anti-ペプチド antibody による binding inhibition system, etc. are performed.これらの研究からPLC-δ1におけるIns(1,4,5)P_3 combining field を解明した. 2. The new regulation of 130kDa molecule has been successful, and the whole acid combination has been decided. Refined protein molecules are composed of several types of proteinsかなものであることが分かった.伝子データベースによりホモロジー検SO をしても、同のものはなく、 The new rule is Ins(1,4,5)P_3 binding molecule.

项目成果

Hirata,Masato: "DL‐myo‐inositol 1,2,4,5‐tetrakisphosphate,a potent analogue of D‐myo‐inositol 1,4,5‐trisphosphate." Molecular Pharmacology. 45. 271-276 (1994)

Hirata, Masato：“DL-肌醇 1,2,4,5-四磷酸，D-肌醇 1,4,5-三磷酸的有效类似物。分子药理学”45. 271-276 (1994)。

Yoshida,Masako: "D‐myo‐inositol 1,4,5‐trisphosphate‐binding proteins in rat brain membranes." Journal of Biochemistry. 115. 973-980 (1994)

Yoshida, Masako：“大鼠脑膜中的 D-肌醇 1,4,5-三磷酸结合蛋白。” 生物化学杂志 115. 973-980 (1994)

Hirata,Masato: "D‐myo‐inositol 1,4,5‐trisphosphate binding domain of phospholipase C‐δ1." Biochemical and Biophysical Research Communications. 205. 1563-1571 (1994)

Hirata, Masato：“磷脂酶 C-δ1 的 D-肌醇 1,4,5-三磷酸结合域。”生物化学和生物物理研究通讯。205。1563-1571 (1994)

Hashii,Minako: "Ca^<2+> influx evoked by inositol‐3,4,5,6‐tetrakisphosphate in ras‐transformed NIH/3T3 fibroblasts." FEBS Letters. 340. 276-280 (1994)

Hashii，Minako：“肌醇-3,4,5,6-四磷酸引起的 Ca^2+ 流入 ras 转化的 NIH/3T3 成纤维细胞。”FEBS Letters 340。276-280 (1994)

Hashii,Minako: "Ca^<2+> influx gated by inositol‐3,4,5,6‐tetrakisphosphate in NIH/3T3 fibroblasts." Biochemicai and Biophysical Research Communications. 200. 1300-1306 (1994)

Hashii，Minako：“NIH/3T3 成纤维细胞中肌醇 3,4,5,6-四磷酸盐控制的 Ca^2+ 流入。” 生物化学和生物物理研究通讯 (1994)。