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中枢神経系におけるイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白

中枢神经系统中的肌醇 1,4,5-三磷酸结合蛋白

基本信息

批准号：
08270233
负责人：
平田雅人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

中枢神経系における分子量130-kDaの新規イノシトール1,4,5-三リン酸[Ins(1,4,5)P_3]結合蛋白質の機能を解明するためのステップとして以下の実験を行った。1.本分子はホスホリパーゼC-δ_1(PLC-δ_1)とアミノ酸配列上は類似しているものの触媒活性を持っていない。その原因を活性中心のアミノ酸配列の変異にあるのではないかと考え、PLC-δ_1の活性中心と考えられているX-領域やY-領域を130-kDa分子の相当領域と置き換えた、リコンビナント蛋白を作製するためのプラスミドを作製した。遺伝子配列は確認したので、今後大腸菌で過剰発現させ、活性測定などの実験を行う。2.本分子の遺伝子をネオマイシン耐性遺伝子とともに組み込んだプラシミドをCOS-1細胞にトランスフェクトした。抗生剤存在下でクローニングすることにより、本分子を安定に発現する細胞の作製に成功した。7回膜貫通型受容体刺激や成長因子刺激にもとづく細胞機能の修飾現象を検討して、本分子の細胞内機能を推定していく。3.本分子もPLC-δ_1と同じくプレックストリン相同領域(PHドメイン)を有した蛋白質である。どの領域がイノシトールリン酸結合領域であるのかを検討するため、本分子のさまざまな部分が欠失するように種々の遺伝子を作製し、COS-1細胞にトランスフェクトした。それぞれについて細胞上清の[^3H]Ins(1,4,5)P_3結合を測定したところ、PHドメインを欠いた分子が結合活性を欠いていたので、結合領域をPHドメインに帰納できた。また、Ins(1,4,5)P_3のみならずIns(1,4,5,6)P_4も結合することが分かった。これらの結果から、種々の蛋白質にあるPHドメインはそれぞれ固有のイノシトールリン酸を結合することによりその機能を発揮するのではないかと提案した。

In the central nervous system, the molecular weight of 130-kDa, molecular weight, molecular weight, molecular weight and molecular weight were analyzed. 1. The molecular structure of C-δ _ 1 (PLC- δ _ 1) is similar to that of cationic acid in its catalytic activity. The reason for this is that the active center, PLC- δ _ 1, active center, Y-field, Y-field, Y-kDa molecule, protein, protein. Please make sure that you have to make sure that you will be infected in the future, and that your activity will be determined by activity test. two。 The molecular weight of this molecule is different from that of the COS-1 cell. In the presence of antibiotics, this molecule is known to be successful in the presence of antibiosis. (7) membrane receptor stimulation, growth factor stimulation and growth factor stimulation. 3. This molecule "PLC- δ _ 1" has the same domain (PH protein δ _ 1) in the same domain as that in the same field. In the field of information technology, the combination of the field information system and the field information system, and the part of the molecular system that is not available for the production of several kinds of equipment, the COS-1 is not available for use in the market. The supernatant of the cell supernatant [^ 3H] Ins (1 pyrrolidine 4) Phen3 is used to determine the activity of the molecular assay, and the field PH is used to determine the activity of the molecule. Baby, Ins (1, 4, 5, 5), 3, 3, 4, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 4, 5, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 4, 5, 4, 4, 5, 4, 5, 4, 4, 4, 5, 4, 4, 4, 5, 4, 4, 5, 4, 4, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 4, 5, 5, 4, 5, 4, 4, 4, 4, 5, 4, 4, 4, 4, 4, 5 The results of the experiment and the results of the experiment show that there is a significant difference between the two groups in terms of the results of the analysis, the results of the analysis, the results of the results, the results, the results and the results.