中枢神経系におけるイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白

中枢神经系统中的肌醇 1,4,5-三磷酸结合蛋白

• 批准号: 09259228
• 负责人: 平田 雅人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09259228/
• 关键词: Ins(1,4,5)P_3; 細胞内Ca^<2+>濃度; ホスホリパーゼC

新しいD-ミオ-イノシトール1,4,5-三リン酸(Ins(1,4,5)P_3)結合蛋白質(p130)を見い出した。p130の細胞内機能を探るための研究を遂行した。1.安定的にp130を発現するCOS-1細胞株を作製し、ブラジキニン(Bk)や上皮成長因子(EGF)刺激に伴う細胞内Ca^<2+>濃度変化を測定した。対照に比し、Bk刺激によるCa^<2+>反応の減弱化が認められた。この結果は濃度-反応曲線が右方シフトしたためであることが分かった。EGF刺激の場合も基本的には同じ結果が得られた。この原因として二つのことが考えられる。発現したp130が細胞膜の内側にあるホスファチジルイノシトール4,5-二リン酸(PtdIns(4,5)P_2)に結合して、PLC活性化による加水分解をブロックしたか、あるいは、PLC活性化によって生成したIns(1,4,5)P_3がp130によって結合され、小胞体上の受容体に結合する量を減らしたためか、である。これを区別するため、Bk刺激によって細胞内に生成したIns(1,4,5)P_3を定量した。刺激前の量はp130を過剰発現した細胞のほうがむしろ多く、刺激に伴って生成するIns(1,4,5)P_3量に対照との相違は認められなかった。この結果は後者の可能性が高いことを支持している。したがって、p130は細胞内Ca^<2+>反応のnegative regulatorとして働いている可能性が考えられる。2.In situハイブリダイゼーションによって中枢神経におけるp130のmRNAの分布を調べた。小脳のプルキンエ細胞、顆粒細胞層、大脳では皮質の特定の細胞層、また、海馬、歯状回に多く分布していることが分かった。

A new protein (p130) binding protein, Ins(1,4,5)P_3, has been identified. P130 intracellular function is explored. 1. Stable p130 expression was detected in COS-1 cell line, and changes in intracellular Ca^<2+> concentration were measured in response to epidermal growth factor (EGF) stimulation. The Ca^<2+>-induced attenuation of Bk and Bk-induced radiation was observed. The result is that the concentration curve is reversed to the right. In the case of EGF stimulation, the basic results are the same. The reason for this is that the two sides of the border are not in agreement. PdIns (4,5)P_2 is bound to the cell membrane by p130, and PdIns (1,4,5) P_3 is bound to the cell membrane by p130. The amount of PdIns (4,5) P_2 bound to the cell membrane by p130 is reduced. In addition, the intracellular production of Ins(1,4,5)P_3 was quantified by Bk stimulation. The amount of P130 before stimulation was detected in the cells, and the amount of Ins(1,4,5) P3 after stimulation was detected in the cells. The result is that the possibility of the latter is high. P130 is a negative regulator of intracellular Ca^<2+>. 2. In situ, the distribution of p130 mRNA in the central nervous system was modulated. The distribution of small cells, granular cells, large cells, hippocampus and dentate gyrus is different.

项目成果

Hirata,M.: "Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor subtypes differentially recognize regioisomers of D-myo-inositol 1,4,5-trisphosphate." Biochem.J.328. 93-98 (1997)

Hirata,M.：“肌醇 1,4,5-三磷酸受体亚型差异性地识别 D-肌醇 1,4,5-三磷酸的区域异构体。”

Yagisawa,H.: "Replacements of single basic amino acids in the pleckstrin homology domain of phospholipase C-^δ1 alter the ligand binding,phospholipase activity and interaction with the plasma membrane." J.Biol.Chem.273. 417-424 (1998)

Yagisawa, H.：“磷脂酶 C-^δ1 的普莱克斯特林同源结构域中单个碱性氨基酸的替换改变了配体结合、磷脂酶活性以及与质膜的相互作用。”J.Biol.Chem.273（ 1998）

Takeuchi,H.: "Distinct specificity in the binding of inositol phosphates by pleckstrin homology domains of pleckstrin,RAC-protein kinase,diacylglycerol kinase and a new 130-kDa protein." Biochim.Biophys.Acta. 1359. 275-285 (1997)

Takeuchi, H.：“pleckstrin、RAC 蛋白激酶、二酰甘油激酶和新的 130 kDa 蛋白的 pleckstrin 同源结构域与肌醇磷酸盐的结合具有明显的特异性。”

Hirata,M.: "Intrinsic inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate binding." Mol.Cell.Biochem.(in press). (1998)

Hirata,M.：“肌醇 1,4,5-三磷酸结合的内在抑制剂。”