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アストログリアによるシナプス外情報伝達機構、クロライドイオン調節の可能性

星形胶质细胞突触外信息传递机制和氯离子调节的可能性

基本信息

批准号：
06680760
负责人：
中村洋一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アストログリア細胞は神経細胞を単にサポートしているだけではなく,神経細胞を反対に制御している可能性をも含めて独自の機能を持つと考えられる様になった。アストログリア細胞の機能やグルタミン酸をめぐる中枢機能制御について裏面に示す種々の研究成果を得た。クロライドイオン(C1^-)の調節については未だ研究が完結していないが以下の知見があるので報告する。C1_-イオン濃度測定に蛍光色素MEQを用いた。励起波長はfura2とほぼ同じで,その蛍光は50mM C1_-により50%消光される。この感受性は細胞内濃度測定に適しており,また細胞内に取り込まれた色素の漏れ出しが少ない長所をもつ。その膜透過性誘導体であるdiH-MEQは非常に不安定で市販されていないため,自家合成した。MEQ-iodide(Molecular Probe)を窒素気中でNaBH_4で還元し,還元物を酢酸エチルで抽出し,anhydrous NaSO_4で乾燥させ,その後窒素気流にて乾固させ冷凍保存した。合成後4日以内に使用した。合成したdiHMEQを計算上0.1-0.2mMの濃度で15分間細胞に取り込ませ,洗浄後顕微鏡下で蛍光強度を画像解析装置で観測した。蛍光の褪色を最小限に抑えるため今回更新したフィルター切替装置により励起時間を短くした。これらの実験設定で種々の測定を繰り返し,以下の問題点があることがわかった。(1)蛍光強度がかなり弱く,内在性のNAD(P)Hの蛍光の変化をも計測してしまう。その為細胞内代謝状態が大幅に変化する,例えば虚血条件負荷のような刺激を加えた場合,蛍光色素なしでの測定を常にできるだけ等しい条件下で行わねばならない。また新しい蛍光色素の開発や細胞内負荷方法の改良も考慮する必要がある。(2)新しいフィルター切替装置を用いても蛍光褪色はかなり大きく,その為に刺激なしでの自然褪色の時間経過をある期間し,それをもって補正する必要がある。これはtributhyltin+valinomycinによる細胞内C1^-濃度と蛍光強度の標準曲線を求める際にも問題となった。(3)測定中に用いる潅流液にCO_2/HCO_3緩衝液を用いるかどうかによってもかなり蛍光強度が変化することから,強力なHCO_3/C1^-交換輸送系が存在することを示唆される。いくつかの克服すべき問題点が明らかとなった。一点ずつ解決する必要があるが,アイソトープの^<36>C1を用いての実験も,並行して行うことも考慮すべきである。

The cells of the brain are divided into two groups: the cells of the brain are divided into three groups; the cells of the brain are divided into three groups: the cells of the brain is divided into three groups; the cells of the brain is divided into The results of the study on the function of the cell and the control of the central function were obtained. The following observations are reported in the study of the regulation of the C1^-. C1-C10-C10 Excitation wavelength: fura2 The sensitivity of this enzyme is determined by the intracellular concentration of the enzyme, and the intracellular concentration of the enzyme is determined by the leakage of the pigment. The membrane permeability inducer is very unstable. MEQ-iodide(Molecular Probe) is preserved in the presence of NaBH_4, anhydrousNaSO_4, anhydrousNaSO_ Use within 4 days after synthesis. DiHMEQ was calculated at concentrations of 0.1- 0.2 mM and measured in 15-minute cells. After washing, the intensity of light was measured by a micro-image analyzer. The minimum time required for light fading is now shorter than the time required for switching devices. The following questions are answered: (1)Light intensity is weak, intrinsic NAD(P)H and light change is measured. This is a significant change in the metabolic state of the cell, such as when the blood condition load and stimulation are added, and when the pigment is measured under normal conditions. It is necessary to consider the development of new photochrome and the improvement of intracellular loading method. (2)The new switching device is used to correct the time period of natural fading due to stimulation. The standard curve of intracellular C1^-concentration and light intensity was calculated. (3)The CO_2/HCO_3 buffer solution was used in the determination. The intensity of light changed, and the strong HCO_3/C1-exchange transport system existed. To overcome the problem, we must make sure that One point is necessary to solve the problem<36>, and the problem is solved in parallel.