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巨大ゲノムDNA導入による発生異常突然変異遺伝子の探索・単離

通过引入大基因组DNA寻找和分离发育异常突变基因

基本信息

批准号：
07672449
负责人：
阿部訓也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672449/
关键词：
YAC 発生突然変異 tコンプレックスゲノム解析

项目摘要

今年度は、従来のトランスジェニックマウス作製技術に関する諸問題の克服と新しい利用法を目指して、酵母人工染色体(YAC)にクローニングされた哺乳類ゲノムDNAを導入したマウス個体作製技術の開発とその応用に関する研究を行った。特に、ポジショナルクローニング法における突然変異責任遺伝子の同定、単離に関する応用として、これまで解析を進めてきたマウス17番染色体のt-コンプレックスに位置する発生異常突然変異の機能的レスキューの実験を進めている。現在まで、初期発生に関与するt^<w5>変異、神経系細胞の分化、機能に関するqk(quaking)変異に関し、数百kbの範囲にまで原因遺伝子に迫っている。これらはいずれも劣性突然変異であり、変異原因遺伝子を含むと予想されるYACDNA導入により突然変異がレスキューされるか否かを指標として導入ゲノム中の原因遺伝子の探索を行うことを試みている。これまでにt^<w5>領域から650kbのYACクローンを得、マウス受精卵に導入し、3系統のYAC導入トランスジェニックマウス、Y11,Y31,Y35を樹立した。Y11系統では〜420kb、Y31系統では〜270kb,Y35系統では〜380kbの長さのYACDNAが導入されていること、さらにトランスジーンのゲノムへの組込み部位は全ての系統で一カ所であり、かつ17番染色体以外であることをFISHによって確認した。これからは、それらのマウスを交配し実際にt^<w5>変異がレスキューされるかを検討していく。またqk変異に関しても同様な実験、およびすでに見つかった候補遺伝子のノックアウトマウス作製を進めている。

This year, we will carry out research on how to overcome the problems related to the introduction of yeast artificial chromosomes (YAC) into mammalian DNA by using new methods. Special, complex, complex, complex. There are differences in current and <w5>early development, differentiation and function of neurocytes, and differences in the cause of gene expression in hundreds of kb of cells. The YAC DNA is introduced into the system, and the cause of the change is explored. The <w5>650kb YAC gene was introduced into the 3-system YAC gene, Y11,Y31 and Y35. Y11 system is ~ 420kb, Y31 system is ~ 270kb,Y35 system is ~ 380kb, YAC DNA is introduced into the system, and FISH is confirmed. This is the first time I've ever seen a woman<w5>. It's not the same thing. It's the same thing.