マウス始原生殖細胞における遺伝子発現の解析

小鼠原始生殖细胞基因表达分析

• 批准号: 10160215
• 负责人: 阿部 訓也
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160215/
• 关键词: 生殖系列; 始原生殖細胞; 哺乳類; cDNAライブラリー; セルソーティング; 遺伝子発現

我々は生殖系列分岐の鍵となる始原生殖細胞(PGC)に着目し,この細胞に発現する遺伝子の体系だった解析を行うことを目的とし研究を開始した.PGCは初期胚にごく少数、それも体細胞にかこまれたかたちで存在するため、研究材科として直接取り扱うことが困難であった.そこで、PGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウスを用い、lacZレポーター発現を指標としてPGCを分離、純化するFACS-gal法を確立した.10.5日-14.5日胚がらPGCを実際にソーティングし、各種マーカーを用いた検索によりほぼ100%に近い純度のPGCが得られたことを確かめた.さらに,より初期のPGC単離のために,Oct3/4プロモーターにGFPをつないだコンストラクトを用いて,トランスジェニックマウスを作製し,これらのトランスジェニック系統の胚体から,より効率良くPGCを単離してくることが可能になった.この純化PGCを用い、テロメレース活性測定やゲノムDNAメチル化様式などの解析が可能になった.また,これを材料に、ローンリンカー法(Mamma1ian Genome2;252-259、1992)によりcDNAライブラリー作製を行った.この純化PGCからのcDNAは既知遺伝子のPGCでの発現解析のみならず、PGCにおける遺伝子発現プロファイルを解析、記述するために有用である.その解析の一端としてこれまで13.5日胚の雌難のPGCそれぞれのライブラリーから4000クローンをピックアップし、2800クローンの配列決定を行なった.このうち有効な配列情報の得られた1555クローンに関してホモロジー検索を行った.その多くはESTクローンを含め既知の遺伝子と相同性を示した.また雌雄で出現頻度に差異のあるクローンも複数認められた.将来的には,PGC各発生段階からライブラリーを作製,解析することにより興味深い配列モチーフを持つクローンやステージ特異的発現を示すクローンを単離し,機能解析につなげていきたいと考えている.また,始原生殖細胞の属性を遺伝子発現レベルで理解していくために,cDNA microarrayを用いた網羅的発現解析を計画している.

The first generation of germ cells (PGC) is difficult to analyze. PGC's The FACS-gal method was established between 10.5 and 14.5 days for PGC separation and purification. In addition, the initial phase of PGC separation,Oct3/4, the use of GFP, the control of GFP, the system of PGC separation, the efficiency of PGC separation, the possibility of PGC separation. The purified PGC was used for the determination of its activity and the analysis of its DNA profile. The Mamma1ian Genome 2;252-259, 1992) was developed for the production of cDNA. The purified PGC cDNA is useful for the analysis and description of the PGC gene expression of the known gene. One end of the analysis is 13.5 days old. The PGC of the female is 13.5 days old. The PGC of the female is 13.5 days old. This information is available in 1555 languages. A lot of information is available on the same page. The frequency difference between male and female is different. In the future,PGC will be developed at various stages, such as control, analysis, deep interest, allocation, maintenance, and special occurrence, and function analysis. In addition, the development of gene expression in primordial germ cells is understood, and the development of cDNA microarray is planned.

项目成果

Kondo,T. et al.: "Genomic organization and expression analysis of the mouse qkl locus." Mammalian Genome. (印刷中). (1999)

Kondo, T. 等人：“小鼠 qkl 基因座的基因组组织和表达分析”（正在出版）。

A,Kikuti.et al.: "cDNA Cloning,Northern hybridization and mapping Shigenari,A.,Kawata,H.,Ikemura,T.analysis of a putative GDS(guanine nucleotide dissociation,Kimura M.,and Inoko,H.stimulator of G proteins)-related protein gene at the centromeric ends of t

A，Kikuti. 等人：“cDNA 克隆、Northern 杂交和作图 Shigenari,A.、Kawata,H.、Ikemura,T. 假定 GDS 的分析（鸟嘌呤核苷酸解离、Kimura M. 和 Inoko,H.stimulator）

Kimura,S.et al.: " Muscle type promoter and its first intronabnormalities in dystrophin in dystrophin gene in patients with Duchenne muscular dystrophy." J.Child.Neurol.13. 290-292 (1998)

Kimura,S.et al.：“杜氏肌营养不良症患者的肌营养不良蛋白基因中的肌肉类型启动子及其第一个内含子异常。”

Abe,K. et al.: "A systematic Molecular Genetic Approach to study Mammalian Germ Line Development." Int.National J.Dev.Biol.42. 1051-1065 (1998)

阿部，K.

Ksnsme,T. et al.: "Testis b-1,4-galactosyltransferase gene maps to mouse chromosome 5." Genomics. 53. 117-118 (1998)

Ksnsme，T.