マウス始原生殖細胞発生過程の分子遺伝学的解析

小鼠原始生殖细胞发育的分子遗传学分析

• 批准号: 09264218
• 负责人: 阿部 訓也
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09264218/
• 关键词: 始原生殖細胞; cDNA; マウス; FACS

[目的]生物を構成する細胞の中で生殖細胞は唯一、次世代に受け継がれると言う意味で不死であり、また全能性を有するという点で、非可逆的な分化を行う体細胞とは大きく異なり、また始原生殖細胞(PGC)は生殖系列の成立、維持の機構を考える上で非常に重要な細胞である.しかし、PGCというごく少数の細胞を単離し、直接分子レベルの解析対象とするのは通常の手法では大変困難であった.そこでそのために必要な諸技術を開発し、生殖系列発生の各ステージでどのような遺伝子が発現するかという基本的知見を得ることを第一義的な目標とする.[成果]PGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウスを用い、lacZ発現を指標としてPGCを分離、純化するFACS-gal法を確立し、胎生11.5-15.5日からのPGCの純化に成功した.このPGCを利用することにより、テロメラーゼ活性の測定やPGCゲノムDNAのメチル化状態等を直接調べることが可能になりPGCという細胞の特質解明の糸口をつかむことができた.またPGCよりRNAを抽出してcDNAを合成し、ローンリンカー法によりcDNA集団の増幅を行った.このcDNAを材料に既知遺伝子のPGCでの発現を調べることが可能になった.さらにこのcDNAを用いてライブラリー作製を行った.これらのライブラリーはPGCにおける遺伝子発現プロファイルを解析、記述するために有用と考えられる.その解析の一端としてこれまで13.5日胚の雌雄のPGCそれぞれのライブラリーから4000クローンをピックアップし、2800クローンの配列決定を行なった.このうち有効な配列情報の得られた1555クローンに関してホモロジー検索を行った.その多くはESTクローンを含め既知の遺伝子と相同性を示した.また雌雄で出現頻度に差異のあるクローンも複数認められた.

[Objective] The germ cell in the cell of biological composition is unique, the next generation is accepted, the meaning is immortal, the totipotency is present, the irreversible differentiation is carried out, the somatic cell is different, the primordial germ cell (PGC) is very important for the establishment and maintenance of the reproductive series. A small number of cells are isolated from each other, and direct molecular analysis is difficult. All necessary technologies for the development of reproductive series are developed, and the basic knowledge of reproductive series is obtained. [Results] The FACS-gal method for separation and purification of PGC was established successfully from 11.5 to 15.5 days after birth. The PGC can be used to determine the activity of PGC, DNA and DNA, etc. PGC RNA was extracted and cDNA was synthesized. The cDNA set was amplified by PCR. This cDNA material is known to contain PGC genes, which can be used to modulate the development of PGC genes. This cDNA is used to control the production process. This is the first time that a PGC has been used to analyze, describe, and analyze the information. The PGC of male and female embryos was determined by the analysis of one end and the arrangement of 4000 and 2800 embryos. This information is available in 1555 languages. A lot of information is available on the same page. The frequency difference between male and female is different.

项目成果

Tanaka, H., Abe, K and Kim, C.-H.: "Quaking gene expression in the zebrafish embryo." Mech.Dev.(印刷中). (1998)

Tanaka, H.、Abe, K 和 Kim, C.-H.：“斑马鱼胚胎中的震动基因表达”（正在出版）。

Kimura, S., Fujishita, S., Ikezawa, M Ogawa, M., Abe, K.and Miike, T.: "Muscle type promoter and its first intron abnormalities in dystrophin gene in patients with Duchenne muscular dystrophy." J.Child Neurol.(印刷中). (1998)

Kimura, S.、Fujishita, S.、Ikezawa, M、Okawa, M.、Abe, K. 和 Miike, T.：“杜氏肌营养不良症患者肌营养不良蛋白基因中的肌肉类型启动子及其第一个内含子异常。”儿童神经醇（正在出版）（1998）。

阿部訓也: "蛋白質核酸酵素 増刊号「生殖細胞の発生と性分化」「マウス始原生殖細胞における遺伝子発現」" 岡田益吉・長濱嘉孝・中辻憲夫 編 共立出版(印刷中),

Kuniya Abe：“蛋白质核酸酶特刊：生殖细胞的发育和性分化”“小鼠原始生殖细胞中的基因表达”编辑：Masukichi Okada、Yoshitaka Nagahama 和 Norio Nakatsuji、Kyoritsu Shuppan（出版中）、

Abe, K.and Noce, T.: "A DEAD-box family protein gene, Ddx4, encoding a murine homolog of Drosophila vasa, maps to the distal end of mouse Chromosome 13." Mammalian Genome. 8,. 622-623. ((1997))

Abe, K. 和 Noce, T.：“DEAD-box 家族蛋白基因 Ddx4，编码果蝇 vasa 的小鼠同源物，定位到小鼠 13 号染色体的远端。”

Abe, K., Ko, M.S.H.and MacGregor, G.R.: "A Systematic Molecular Genetic Approach to Study Mammalian Germ Line Development." Int.National J.Dev.Biol.(印刷中). (1998)

Abe, K.、Ko, M.S.H. 和 MacGregor, G.R.：“研究哺乳动物种系发育的系统分子遗传学方法”。Int.National J.Dev.Biol.（出版中）。