強力なカフェイン感受性チャンネル開口薬MBEDを用いたCa遊離チャンネルの研究

使用 MBED（一种强效咖啡因敏感通道开放剂）研究 Ca 释放通道

• 批准号: 03268202
• 负责人: 大泉 康
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03268202/
• 关键词: カルシウム; チャンネル; カフェイン; 血管平滑筋; トキシン; タンパク精製

まず,ウシ大動脈平滑筋のミクロソ-ム画分の[ ^3H]MBED結合能について検討したところ,特異的な結合部位の存在が明らかとなり,その解離定数および最大結合量としてそれぞれ50nMおよび20pmol/mg‐proteinの値を得た.ついで,この[ ^3H]MBED結合蛋白質の精製を試みた.平滑筋ミクロソ-ムを可溶化し,MonoQカラムによる陰イオン交換クロマトに付したところ,塩濃度が0.2Mおよび0.4M付近に2つの特異的結合能のピ-クが溶出された.前半のピ-クには分子量〜130KDa,〜58KDaの2つの主要なバンドが認められ,一方,後半のピ-クには微弱な多数のバンドが存在した.そこで前半のピ-クを脱塩後,再度MonoQカラムクロマトに付した.塩濃度0.22Mの位置に〜130KDa,〜58KDaの2つのバンドが濃縮された.このピ-クをSuperose6カラムを用いてゲル濾過に付したところ,2つの主要なピ-クが得られ,それぞれ〜130KDa,〜58KDaのバンドに対応していた.このうち〜58KDaのピ-クを含む画分の特異的結合能が最も高かったため,この画分をMonoQカラムクロマトに付したところ,塩濃度が約0.21Mの位置に特異的結合能の鋭いピ-クが検出された.その中央の画分には〜58KDaの蛋白質がほぼ単一バンドとして認められ,MBEDの特異的結合能のピ-クと一致した.以上のようにウシ大動脈平滑筋ミクロソ-ムから〜58KDaの[ ^3H]MBED結合蛋白質が精製されたが,収率が低いという問題点が残された.その機能を調べるためには,収率の高い精製法を確立する必要があるため,現在,この58DKaに対する特異的抗体の調製を進めており,それを用いてアフィニティ-精製を試みる予定である.得られた蛋白質の分子量は,58KDaと,リアノジン結合蛋白質と比較してかなり小さい.今後,この蛋白質が,Ca遊離チャネルとしての機能を有するのかどうか検討する.

The [ ^3H]MBED binding energy of the [ ^3H]MBED component of the smooth muscle of the aorta was measured, and the existence of specific binding sites was clearly observed. The dissociation threshold was 50nM and the maximum binding amount was 20pmol/mg protein.ついで,この[ ^3H]MBED结合蛋白质の精制を试みた. The specific binding energy of the monoQ solution is 0.2M and 0.4M. The molecular weight of the first half is ~ 130KDa,~ 58KDa, and the main part of the first half is ~ 130KDa, and the main part of the second half is ~ 130 KDa. After the first half of the game, MonoQ again. Concentration 0.22M ~ 130KDa,~ 58KDa and 2 concentrations are concentrated. This is the main reason why the Superse6 category is used in the middle of the filter, and the main reason why the Superse6 category is used in the middle of the filter is that the filter is used in the middle of the filter, and the main filter is used in the middle of the filter, and the main filter is used in the middle of the filter. The specific binding energy of the monoQ complex was highest at ~ 58KDa, and the specific binding energy of the monoQ complex was highest at ~ 0.21 M. The protein of ~ 58KDa in the central part of the system has the same binding energy as MBED. The above mentioned problems were solved by the purification of ~ 58KDa and [ ^3H]MBED binding protein, and the yield was low. The function of the modulation is to establish the high purity of the antibody. Now, the modulation of the specific antibody is to be determined. The molecular weight of the protein is 58KDa, and the protein binding protein is relatively small. From now on, the function of this protein is discussed.

项目成果

Kobayashi,M.,Muroyama,A.,Nakamura,H.,Kobayashi,J.&Ohizumi,Y.: "Xestoquinone,a novel cardiotonic agent activates actomyosin ATPase to enhance contractility of skinned cardic skletal muscle fibers." J.phamacol.Exp.Ther.257. 90-94 (1991)

小林，M.，室山，A.，中村，H.，小林，J.

Kobayashi,M.,Nakamura,H.,Kobayashi,J.&Ohizumi,Y.: "Mechanism of inotropic action of xestoquinone,a novel cardiotonic agent isolated from sea sponge." J.Pharmacol.Exp.Ther.257. 82-89 (1991)

小林，M.，中村，H.，小林，J.

Sato,K.,Ishida,Y.,Wakamatsu,K.,Kato,R.,Honda,H.,Ohizumi,Y.,Nakamura,H.,Ohya,M.,Lancelin,J.,Kohda,D.&Inagaki,F.: "Active site of μ‐conotoxin GIIIA,a peptide blocker of muscle sodium channels." J.Biol.Chem.266. 16989-16991 (1991)

佐藤 K.、石田 Y.、若松 K.、加藤 R.、本田 H.、大泉 Y.、中村 H.、奥谷 M.、兰斯林 J.、幸田 D. & Inagaki,F.：“μ-芋螺毒素 GIIIA 的活性位点，一种肌肉钠通道的肽阻断剂。J.Biol.Chem.266（1991）。”

Seino,A.,Kobayashi,M.,Kobayashi,J.,Fang,J.,Ishibashi,M.,Nakamura,H.,Momose,K.&Ohizumi,Y.: "9‐methyl‐7bromoeudistomin D,a powerful radio‐labelable Ca^<++> releaser having caffeine‐like properties,acts on Ca^<++> ‐induced Ca^<++> release channels of Sarco‐p

Seino, A.、Kobayashi, M.、Kobayashi, J.、Fang, J.、Ishibashi, M.、Nakamura, H.、Momose, K. 和 Ohizumi, Y.：“9-甲基-7bromoeudistomin D，一种强大的放射性标记的 Ca^<++> 释放剂具有咖啡因样特性，作用于 Ca^<++> 诱导的 Sarco-p 的 Ca^<++> 释放通道

大泉 康: "続医薬品の開発 第10巻 海洋資源と医薬品II" 広川書店, 548 (1991)

大泉靖：《续药品开发第10卷海洋资源与药品II》广川书店，548（1991）