血管内皮及び平滑筋プロスタグランジン受容体とこれを介する収縮弛緩機構の研究

血管内皮和平滑肌前列腺素受体及其介导的收缩和舒张机制研究

基本信息

批准号：
03268218
负责人：
成宮周
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロスタグランジン(PG)、トロンボキサン(TX)、ロイコトリエン(LT)などのアラキドン酸代謝物が、血管系で多彩な作用を示すことはよく知られている。これらの作用は各々の代謝物に特異的な受容体を介して発現されていると考えられるが、血管系のどこにどれだけの種類のPG、TX、LT受容体が存在しているかは明らかでない。我々は昨年これら受容体の一つであるヒトTXA_2受容体のcDNAクロ-ニングに初めて成功した。本研究はこの成果をもとに他のPG、LT受容体の構造を明らかにし、これらの血管系における存在、分布と機能を明らかにすることである。このため本年度は以下の研究を行った。1.マウスTXA受容体のcDNAクロ-ニング.ヒトTXA_2受容体の第3及び第6膜貫通領域のアミノ酸配列に対応するオリゴヌクレオチドを合成し、これを用いてマウス肺cDNAでPCRを行った。これにより418b、p、よりなるcDNA断片を得、これをプロ-ブとしてハイブリダィゼ-ションを行い1個の陽性クロンを得た。このクロンを解析した結果、これが341個のアミノ酸より成るロドプシン型の受容体をコ-ドしていること、この受容体は発現実験よりマウスTXA_2受容体であることが明らかとなった。また、このmRWAが胸腺、脾、肺、腎によく発現されていることが明らかとなった。2.マウス、PGE受容体(EP3サブタイプ)のcDNAクロ-ニング.上記cDNA断片をプロ-ブとしてマウスの色々なcDNAライブラリ-でホモDジ-スクリ-ニングを行い、最終的にPー815細胞のライブラリ-より1個の陽性クロンを得た。解析の結果、これが365個のアミノ酸より成る蛋白をコ-ドしていること、これがマウスPGE受容体であることが判明した。この受容体はGi蛋白にカップル(EP_3アゴニストに親和性をもつことから、PGE受容体のEP_3サブタイプであると結論された。

众所周知，花生四烯酸代谢产物，例如前列腺素（PG），血栓烷（TX）和白细胞（LT）在脉管系统中表现出多种影响。尽管这些作用被认为是通过针对每种代谢产物特异的受体表达的，但尚不清楚脉管系统中存在多少种类型的PG，TX和LT受体。去年，我们是其中一种成功的cDNA克隆，即人类TXA_2受体。这项研究使用该发现来阐明其他PG和LT受体的结构，并阐明它们在脉管系统中的存在，分布和功能。因此，今年进行了以下研究。 1。小鼠TXA受体的cDNA克隆。合成了与小鼠肺cDNA一起使用这种方法，对对应于人TxA_2受体的第三和第六个跨膜区域的氨基酸序列进行了寡核苷酸。这导致由418b，p组成的cDNA片段，并以此为探针杂交以获得一个阳性。对该cron的分析表明，它编码由341个氨基酸组成的视紫红质型受体，并且该受体是来自表达实验的小鼠TXA_2受体。还揭示了这种MRWA在胸腺，脾，肺和肾脏中很好地表达。 2。小鼠PGE受体的克隆（EP3亚型）。使用上述cDNA片段作为探针，使用小鼠中的各种cDNA文库进行谐波筛分，最后从P-815细胞的库中获得一个阳性克隆。分析表明，它编码由365个氨基酸组成的蛋白质，并且是小鼠PGE受体。该受体对GI蛋白具有亲和力（EP_3激动剂），得出的结论是它是PGE受体的EP_3亚型。