新規に開発した分子ツール群の活用による心筋イオンチャンネル群の分子的解析

使用新开发的分子工具对心肌离子通道进行分子分析

• 批准号: 04248201
• 负责人: 中山 仁
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04248201/
• 关键词: 心筋イオンチャンネル; 光アフィニティラベル; ジヒドロピリジン; Ca^<2+>チャンネル; Na^+チャンネル; K^+チャンネル

1.L型Ca^<2+>チャンネルに対する代表的なブロッカーである14-ジヒドロピリジン化合物の結合部位を初めて同定した昨年度の骨格筋標品での成果をふまえ,本年度は心筋標品を用いてその検索を進めた。その結果,ジヒドロピリジン化合物の結合部位は心筋標品においても骨格筋同様,ドメインIIIとドメインIVの2ヶ所の特定部位であることを明らかにした。またこの2ヶ所のアミノ酸配列を心筋と骨格筋で比較したところ,数個所でアミノ酸置換がみられることから,この置換が両組織におけるジヒドロピリジン化合物に対する親和性の差を決めていると推定された。2.心筋Na^+チャンネルをターゲットする抗不整脈薬メキシレチンの結合部位を光アフィニティラベル法によって明らかにするため,そのラベル用試薬の調製を行った。またラベル部位同定のためのツールとして抗ペプチド抗体2種と抗リガンド抗体を作製した。3.ATP感受性K^+チャンネルの分子的同定をめざし,トリチウム標識したグリベンケラミド型光ラベル試薬を合成した。この試薬は心筋のATP感受性K^+チャンネル標品とナノモーラーオーダーの高い親和性を有することが確認できた。この試薬を用いて光ラベル反応を行ったところ,K^+チャンネルタンパク候補となる分子を特異的にラベルすることができたので,これを用いて現在このタンパク分子の同定を進めている。

1. L-type Ca <2+> complex represents the binding site of the 14-terminal complex, and the results of the last year's bone and tendon standard are being studied. As a result, the binding site of the compound was similar to that of the standard compound, and the specific site of the compound III and IV was clearly identified. The difference in affinity between the two groups of compounds was determined by comparing the affinity between the two groups of compounds. 2. The heart muscle Na^+ cell growth rate is higher than that of the normal cell growth rate. Two kinds of anti-tumor antibodies were produced. 3. The molecular identity of ATP sensitive K^+ molecules is determined by the synthesis of ATP sensitive K^+ molecules. This test confirms that the ATP sensitivity of the tendon is K^+. This test uses the light source to determine the identity of the molecule,K^+, and K^+.

项目成果

H.Nakayama: "Characterization of sacchride moiety in the electroplax sodium channel" Chem.Pharm.Bull.40. 3287-3291 (1992)

H.Nakayama：“Electroplax 钠通道中糖部分的表征”Chem.Pharm.Bull.40。

Y.Hatanaka: "Photoaffinity labeling of the electroplax sodium channel with a photoreactive n-conotoxin carring a radioactive and chromogenic derivative." Chem.Pharm.Bull.40. 2597-2539 (1992)

Y.Hatanaka：“利用携带放射性和显色衍生物的光反应性 n-芋螺毒素对 electroplax 钠通道进行光亲和标记。”

H.Nakayama: "Photolabeled sites with a tetrodotoxin derivative in the domain III and IV of the electroplax sodium channel." Biochem.Biophys.Res.Commun. 184. 900-907 (1992)

H.Nakayama：“在 electroplax 钠通道的 III 域和 IV 域中用河豚毒素衍生物进行光标记的位点。”

A.Kuniyasu: "Structural characterization of the cardiac calcium channel from porcine hearts." J.Biochem.112. 235-242 (1992)

A.Kuniyasu：“猪心脏钙通道的结构特征。”

H.Nakayama: "A site-directed antibody which inhibits phosphorylation of the rat brain sodium channel by cAMP-dependent protein kinase" Biochim.Biophys.Acta. 1175. 67-72 (1992)

H.Nakayama：“一种通过 cAMP 依赖性蛋白激酶抑制大鼠脑钠通道磷酸化的定点抗体”Biochim.Biophys.Acta。