新トランスポーター・スルホニルウレア受容体とK-ATPチャネルの構造と機能の解析

新型磺酰脲类转运蛋白受体及K-ATP通道的结构与功能分析

• 批准号: 08268241
• 负责人: 中山 仁
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08268241/
• 关键词: スルホニルウレア受容体; グリベンクラミド; 光アフィニティラベル; 心筋; K-ATPチャネル; ホモロジー

心筋のスルホニルウレア受容体(SUR)とATP-Kチャネルの分子実体と機能協関を明らかにすることを目的に研究を開始した。本年度に得られた成果を以下に述べる。(1)心筋のSURをタンパク質レベルで明らかにすべく、そのリガンド[^3H]-glibenclamideにより光アフィニテイラベルを行ったところ、SUR2遺伝子の翻訳産物とは分子量が明らかにことなる80kDaのポリペプチド(p80)がラベルされることがわかった。この手法を膵β細胞由来のHLT細胞に適用した場合には、予想通りSUR(140kDa)分子がラベルされる事実も、一連の光ラベルが特異的であることを裏付ける。光ラベルされたp80を精製単離し、アミノ酸シークエンサーで解析したところ、N末端から39残基の配列が解析できた。この配列はSUR2とはホモロジーがなく、高いホモロジーをもつ分子として検索されたのは、CD36や脂肪酸輸送タンパクであった。これらのタンパクは、コレステロール代謝と関連するスカベンジャー受容体スーパーファミリーに属するものである。インスリン非依存性糖尿病の治療薬として用いられるSU化合物が、動脈硬化と関連するといわれるスカベンジャー受容体とも結合することの結果は初めてのものであり、また病態の上からも糖尿病と動脈硬化の関連が指摘されているだけに、この結果は興味深い。(2)心筋K-ATPチャネルの有力候補の一つであるuKATP(Kir6.1)のアミノ酸配列の一部に対する抗体を作製し、これを用いて心筋中には45kDaの分子(uKATP)の存在が確認できた。また、この抗体を用いて虚血ラットにおけるDATP量の変化を調べたところ、uKAPT(Kir6.1)の選択的な増加が観察された(京都大学医学部・堀江稔博士との共同研究)。

Heart muscle の ス ル ホ ニ ル ウ レ ア by let body (SUR) と ATP - K チ ャ ネ ル の molecular と be body function of masato を Ming ら か に す る こ と を objectives に を began し た. The られた achievements of に in the current year を に describe べる. (1) the heart muscle の SUR を タ ン パ ク qualitative レ ベ ル で Ming ら か に す べ く, そ の リ ガ ン ド [^ 3 h] - glibenclamide に よ り light ア フ ィ ニ テ イ ラ ベ ル を line っ た と こ ろ, SUR2 but 伝 の turn 訳 product と は molecular weight が Ming ら か に こ と な る 80 kda の ポ リ ペ プ チ ド (p80) が ラ ベ ル Youdaoplaceholder0 とがわ った った. こ の gimmick を Cui beta cell origin の HLT cells に applicable し た occasions に は, to think り SUR (140 kda) molecular が ラ ベ ル さ れ る things be も, for の light ラ ベ ル が specific で あ る こ と を in pay け る. Light ラ ベ ル さ れ た p80 を refined 単 し, ア ミ ノ acid シ ー ク エ ン サ ー で parsing し た と こ ろ, N terminal か ら 39 residues の match column が parsing で き た. こ の match column は SUR2 と は ホ モ ロ ジ ー が な く, high い ホ モ ロ ジ ー を も つ molecular と し て 検 cable さ れ た の は, CD36 や fatty acid transport タ ン パ ク で あ っ た. こ れ ら の タ ン パ ク は, コ レ ス テ ロ ー ル metabolic と masato even す る ス カ ベ ン ジ ャ ー by let body ス ー パ ー フ ァ ミ リ ー に genus す る も の で あ る. イ ン ス リ ン non dependency treating diabetes の 薬 と し て in い ら れ る が SU compounds, arteriosclerosis と masato even す る と い わ れ る ス カ ベ ン ジ ャ ー by let body と も combining す る こ と の early results は め て の も の で あ り, ま た on pathological の か ら と も diabetes atherosclerosis の masato even が blame さ れ て い る だ け に, こ は tumblers deep い の results. (2) the heart muscle - K ATP チ ャ ネ ル の powerful backup の つ で あ る uKATP (Kir6.1) の ア ミ ノ acid with column の a に す seaborne る し, the antibody を cropping こ れ を with い て in heart muscle に は 45 kda の molecules (uKATP) の が confirm で き た. Antibody を use い ま た, こ の て virtual blood ラ ッ ト に お け る DATP quantity の variations change を adjustable べ た と こ ろ, uKAPT (Kir6.1) の sentaku な raised and が 観 examine さ れ た gen-gian mori と doc (Kyoto university health science の joint research).

项目成果

H.Nakayama,et al.: "Chemical identification of the binding sites for calcium channel antagonists" Heterocycles. 42. 901-909 (1995)

H.Nakayama 等人：“钙通道拮抗剂结合位点的化学鉴定”杂环。

A.Kuniyasu,et al.: "Identification of the binding region for a new calcium antagonist within the α1 subunit of calcium channels" J.Biol.Chem.(印刷中).

A. Kuniyasu 等人：“钙通道 α1 亚基内新钙拮抗剂的结合区域的鉴定”J. Biol。

Y.Hatamaka,et al.: "Diazirine-based photoaffinity labeling : Chemical approach to biological in terfaces" Rev.Heteroatom Chem.14. 213-243 (1996)

Y.Hatamaka 等人：“基于二氮丙啶的光亲和标记：生物界面的化学方法”Rev.Heteroatom Chem.14。

A.Kuniyasu,et al.: "Identification of the binding region for a new calcium antagonist within the α1 subunit of calcium channels" J.Biol.Chem.(印刷中). (1997)

A. Kuniyasu 等人：“钙通道 α1 亚基内新钙拮抗剂的结合区域的鉴定”J. Biol。（出版中）。

Y.Hatamaka,et al.: "Synthesis of the nitro-substituted aryl diazirines" Chem.pharm.Bull.42. 826-831 (1995)

Y.Hatamaka 等人：“硝基取代的芳基二氮丙啶的合成”Chem.pharm.Bull.42。