イオンチャンネル機能を実現する超分子構造の化学的,物理学的解析

实现离子通道功能的超分子结构的化学和物理分析

• 批准号: 08219233
• 负责人: 中山 仁
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08219233/
• 关键词: L型Caチャンネル; ジヒドロピリジン化合物; エナンチオマー; 光学分割; Naチャンネル; 二次元結晶

細胞情報伝達系においてトリガーの役割を果すイオンチャンネルや受容体の一次構造は、主に分子生物学的手法により明らかになってきた。次のステップはその立体構造、ならびに機能修飾物質の特異的結合で生成する複合体の超分子構造を明らかにする必要がある。本研究ではこの目的を達成する上で至近距離にある2つのイオンチャンネルをとりあげ、次の2点を明らかにすることを目的とした。本年度得られた結果を以下に要約する。1、Naチャンネルの二次元結晶解析:電気ウナギ発電器官から、従来法よりはるかに迅速、かつ高純度に精製する方法の特徴を活かした、チャンネルタンパク質の供給法はほぼ確立できた。二次元結晶化に必要な条件として、チャンネルタンパク質の濃度(1mg/ml)、0.2M NaCl共存による安定化効果などの条件を設定できたが、結晶化を試みた回数が十分に多くはなく、未だに二次元結晶化に成功していない。安定供給法が確立できただけに、今後も引き続き二次元結晶化を進める。2、L型Caチャンネルに正反対の作用をもたらす一対のキラル薬物結合部位の解析:十分な放射比活性をもって^3H標識した薬物(光ラベル用ジヒドロピリジン)の各エナンチオマーは、キラル分離用カラムの使用によって完全に分離できた。アゴニストの結合には分極状態を保持できるCaチャンネル標品が必要となるが、これまでに検討した膜ベシクル標品では保持時間が十分ではなく、またBH_3Cl細胞ではL型Caチャンネルの発現量が少なかった。今後、L型Caチャンネル遺伝子をトランスフェクトしたツメガエル卵母細胞を用いる等の工夫で解決を図る必要がある。

The primary structure of cell receptor and molecular biology methods for cell information transmission system It is necessary for the supramolecular structure of the complex to be formed by the specific combination of the functional modifier and the stereostructure of the secondary modifier. This study aims to achieve the goal of close range. This year's results are as follows: 1. The analysis of the secondary crystal of Na: the characteristics of the method of refining high purity and high purity are active and established. The necessary conditions for secondary crystallization are: concentration of solid (1mg/ml), 0.2M NaCl blue shift, stabilization effect, and the number of crystallization cycles. Stable supply method is established, and in the future, it will be introduced into the secondary crystallization process. 2. Analysis of the binding sites of L-type Ca ~(2 +) compounds: 10 - 10% specific radioactivity, 3H identification, and the use of L-type Ca ~(2 +) compounds for separation. The binding state of Ca ~(2 +) in BH_3Cl cells was maintained for 10 days, and the amount of L-type Ca ~(2 +) in BH_3Cl cells was decreased. In the future, it is necessary to solve the problem of L-type Ca ~(2 +)-induced oocytes.

项目成果

A.Kuniyasu,et al.: "Identification of the 1,4-dihydropyridine binding sites within the α1 subunit of the cardiac calcium channels" Eur.J.Biochem. (印刷中). (1997)

A.Kuniyasu 等人：“心脏钙通道 α1 亚基内 1,4-二氢吡啶结合位点的鉴定”Eur.J.Biochem（出版中）。

H.Nakauama,et al.: "Chemical identification of the binding sites for calcium channel antagonists" Heterocycles. 42. 901-909 (1995)

H.Nakauama 等人：“钙通道拮抗剂结合位点的化学鉴定”杂环。

Y.Hatanaka,et al.: "Diazirine-based photoaffinity labeling : Chemical approach to biological in terfaces" Rev.Heteroatom Chem.14. 213-243 (1996)

Y.Hatanaka 等人：“基于二氮丙啶的光亲和标记：生物界面的化学方法”Rev.Heteroatom Chem.14。

Y.Hatanaka,et al.: "Synthesis of the nitro-substituted aryl diazirines" Chem.pharm.Bull. 42. 826-831 (1995)

Y.Hatanaka 等人：“硝基取代的芳基二氮丙啶的合成”Chem.pharm.Bull。

H.Nakayama,et al.: "Identification of the binding sites for calcium channel antagonists" Japn.Heart J.37. 643-650 (1996)

H.Nakayama 等：“钙通道拮抗剂结合位点的鉴定”Japn.Heart J.37。