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一本鎖DNAヘアピン構造を認識する複製タンパク質の構造と機能

识别单链DNA发夹结构的复制蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
04254206
负责人：
正井久雄
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

一本鎖DNAヘアピン構造を特異的に認識、結合して複製複合体(プラモソーム)の形成を促進する大腸菌PriAタンパン質の構造と機能の解析から以下の結果を得た。1)種々のプラスミドから単離したPriAタンパク質の標的配列(n'サイト)は、その塩基配列の類似性から5個のグループに分類された。いずれのグループも特徴的なステム=ループ構造を形成するが、全てのグループに共通な配列は見いだされないことから、PriAタンパク質は標的配列の高次構造を認識することが示唆された。2)PriAタンパク質はDEAD/DEX.HファミリーとよばれるRNAヘリカーゼに保存されるアミノ酸モチーフと共に、CXXC(C:システイン)配列が4回繰り返されるZnフィンガー様構造を所有している。3)PriAタンパク質(732アミノ酸)のN端545アミノ酸を所持する変異体は、野性体の約1/100の比活性ではあるが、有意なDNA複製能、(d)ATP加水分解能、およびDNAヘリカーゼ能を所有していることが示された。この事実はRNAヘリカーゼ保存ドメインVIはPriAタンパク質の一本鎖DNAヘアピン結合およびそれに伴うプライモソーム形成にとっては必須でないことを示す。4)South-western法により、N端311アミノ酸のみをもつPriAタンパク質変異体はDNAに結合できるが、N端311アミノ酸を欠損しC端のみをもつ変異体は結合できないことから、PriAタンパク質のDNA結合ドメインはN端311アミノ酸内に限定された。5)PriAタンパク質はn'サイト配列をもつRNAにも特異的に結合する。しかしながら、RNA結合はPriAタンパク質の(d)ATP加水分解能を活性化できないことから、DNA結合とRNA結合は質的に異なる可能性が示唆された。

The DNA structure is a unique recognition and binding replication complex. The analysis of the structure and function of the Escherichia coli PriAタンパン quality that promotes the formation of bacteria resulted in the following results. 1) Arrangement (n 'サイト)は、その塩ordinatearrangementのsimilarityから5のグループにClassificationされた.いずれのグループも特徴's なステム=ループstructure をformation するが, all てのグループに common arrangement は见いだされないことから、PriAタンパク性は式的综合の Higher-order structure をKnowledge することが说憆された. 2)PriA タンパクqualityはDEAD/DEX.モチーフと公に, CXXC (C:システイン) is equipped with が4粲り回されるZnフィンガー様structuralをall している. 3) The specific activity of the N-terminal 545-amino acid of PriA タンパク (732 アミノ acid) is about 1/100 of the isoform and wild form.ではあるが, intentional なDNA replication energy, (d)ATP hydrolysis energy, およびDNA ヘリカーゼ能をall していることが Show された.この事実はRNAヘリカーゼSave ドメインVIはPriAタンパク性の本 lockDNA The ヘアピン combined with the およびそれに合うプライモソーム to form the にとっては must be でないことをshowす. 4) South-western method: N-terminal 311 アミノ acid のみをもつPriA タンパク plasmid allogeneic DNA に binding できるが, N-terminal 311 アミPriAタンパクDNA-binding ドメインはN-terminal 311アミノ acid internal にlimited された. 5) PriA DNA is a specific combination of RNA and RNA.しかしながら、RNA binding はPriAタンパク性の(d)ATP hydrolysis energy activity The possibility of chemical change, DNA binding, and RNA binding is different.