一本鎖DNAヘアピン構造を認識する複製タンパク質の構造と機能

识别单链DNA发夹结构的复制蛋白的结构和功能

• 批准号: 04254206
• 负责人: 正井 久雄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04254206/
• 关键词: DNA複製; 一本鎖DNAヘアピン; DEAD; DEXHファミリー; DNAヘリカーゼ; プラモソーム; 欠失変異体; ATP加水分解; Znフィンガー

一本鎖DNAヘアピン構造を特異的に認識、結合して複製複合体(プラモソーム)の形成を促進する大腸菌PriAタンパン質の構造と機能の解析から以下の結果を得た。1)種々のプラスミドから単離したPriAタンパク質の標的配列(n'サイト)は、その塩基配列の類似性から5個のグループに分類された。いずれのグループも特徴的なステム=ループ構造を形成するが、全てのグループに共通な配列は見いだされないことから、PriAタンパク質は標的配列の高次構造を認識することが示唆された。2)PriAタンパク質はDEAD/DEX.HファミリーとよばれるRNAヘリカーゼに保存されるアミノ酸モチーフと共に、CXXC(C:システイン)配列が4回繰り返されるZnフィンガー様構造を所有している。3)PriAタンパク質(732アミノ酸)のN端545アミノ酸を所持する変異体は、野性体の約1/100の比活性ではあるが、有意なDNA複製能、(d)ATP加水分解能、およびDNAヘリカーゼ能を所有していることが示された。この事実はRNAヘリカーゼ保存ドメインVIはPriAタンパク質の一本鎖DNAヘアピン結合およびそれに伴うプライモソーム形成にとっては必須でないことを示す。4)South-western法により、N端311アミノ酸のみをもつPriAタンパク質変異体はDNAに結合できるが、N端311アミノ酸を欠損しC端のみをもつ変異体は結合できないことから、PriAタンパク質のDNA結合ドメインはN端311アミノ酸内に限定された。5)PriAタンパク質はn'サイト配列をもつRNAにも特異的に結合する。しかしながら、RNA結合はPriAタンパク質の(d)ATP加水分解能を活性化できないことから、DNA結合とRNA結合は質的に異なる可能性が示唆された。

A lock DNA ヘ ア ピ を specific に ン structure knowledge, combining し て replication complex (プ ラ モ ソ ー ム) の form を promote す る coliform PriA タ ン パ ン qualitative の tectonic と function の parsing か ら の results under を た. 1) kind of 々 の プ ラ ス ミ ド か ら 単 from し た PriA タ ン パ ク mass の mark with column (n 'サ イ ト) は, そ の salt base with column の similarity か ら five の グ ル ー プ に classification さ れ た. い ず れ の グ ル ー プ も of 徴 な ス テ ム = ル ー を プ structure formation す る が, whole て の グ ル ー プ に な with common column は see い だ さ れ な い こ と か ら, PriA タ ン パ ク qualitative は mark with column の high secondary tectonic を know す る こ と が in stopping さ れ た. 2) PriA タ ン パ ク qualitative は DEAD/DEX. H フ ァ ミ リ ー と よ ば れ る RNA ヘ リ カ ー ゼ に save さ れ る ア ミ ノ acid モ チ ー フ と に, CXXC (C: シ ス テ イ ン) with column が 4 back Qiao り return さ れ る zinc フ ィ ン ガ ー all others in tectonic を し て い る. 3) PriA タ ン パ ク mass (732 ア ミ ノ acid) の n-terminal 545 ア ミ ノ す held by the acid を る - variant は about 1/100 of that, the wild body の の than active で は あ る が, intentionally な DNA replication can be, (d) ATP hydrolysis, お よ び DNA ヘ リ カ ー ゼ を all し て い る こ と が shown さ れ た. こ の things be は RNA ヘ リ カ ー ゼ save ド メ イ ン VI は PriA タ ン パ ク qualitative の a lock DNA ヘ ア ピ ン combining お よ び そ れ に with う プ ラ イ モ ソ ー ム form に と っ て は must で な い こ と を す. 4) South - western に よ り, n-terminal 311 ア ミ ノ acid の み を も つ PriA タ ン パ ク mass variations variants は DNA に combining で き る が, n-terminal 311 ア ミ ノ acid を owe the damage of the c-terminal の し み を も つ - は allograft combined with で き な い こ と か ら, PriA タ ン パ ク qualitative の dna-binding ド メ イ ン は n-terminal 311 ア ミ Youdaoplaceholder0 within the acid に limits された. 5)PriAタ パ パ the <s:1> n'サ ト binds to を <s:1> <s:1> RNAに に specific に binding する. し か し な が ら, RNA combined は PriA タ ン パ ク qualitative の (d) ATP hydrolysis to を activeness で き な い こ と か ら combining qualitative に は と RNA, DNA different な が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

正井 久雄: "ONA複製と細胞増殖" 化学と生物. 30. 495-501 (1992)

Hisao Masai：“ONA 复制和细胞增殖”化学与生物学 30. 495-501 (1992)。

Masai: "¨Roles of the G site and φX174-type primosome assaembly site in priming leading strand synthesis:initiation by a mobile primosome and replication-fork arrest by RepA protein bound to oriR¨" J.Biol.Chem.265. 15124-15133 (1990)

Masai：“G 位点和 φX174 型引发体装配位点在引发前导链合成中的作用：由移动引发体启动和与 oriR 结合的 RepA 蛋白抑制复制叉”J.Biol.Chem.265-。 15133 (1990)

Nomura et al: "¨Identification of eleven single strand initiation sequences (ssi) for DNA replication in F,R6K,R100,and ColE2 plasmids¨" Gene. 108. 15-22

Nomura 等人：““F、R6K、R100 和 ColE2 质粒中 DNA 复制的 11 个单链起始序列 (ssi) 的鉴定”Gene。

Masai: "¨The ABC-primosome:a novel priming system employing dnaA,dnaB,dnaC,and primase on a hairpin containing a dnaA box sequence.¨" J.Biol.Chem.265. 15134-15144 (1990)

Masai：““ABC 引发体：一种新型引发系统，在包含 dnaA 盒序列的发夹上采用 dnaA、dnaB、dnaC 和引物酶。”J.Biol.Chem.265 (1990)。

Lee et al: "¨The priA gene encoding the primosonal replicative n'protein of Escherichia coli.¨" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 4620-4624 (1990)

Lee 等人：““priA 基因编码大肠杆菌的原始复制 n 蛋白。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87. 4620-4624 (1990)。