一本鎖DNAヘアピン構造を認識する複製タンパク質の構造と機能

识别单链DNA发夹结构的复制蛋白的结构和功能

• 批准号: 03259205
• 负责人: 正井 久雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259205/
• 关键词: DNA複製タンパク質; DNA結合タンパク質; ATP加水分解酵素; ATP結合タンパク質; DNAヘリカ-ゼ; 亜鉛結合タンパク質; 一本鎖DNAヘアピン

priA遺伝子は、大腸菌染色体88.7分の位置に存在し、これまでに同定されていない新しい遺伝子であることが明かとなった。一方、構造解析の結果、priAはヌクレオチド結合タンパク質に共通に保存されている2つのモチ-フを所有していることが示された。特にGXGXXGKTを含むモチ-フは大腸菌の分子量75kD前後の他の3つのヘリカ-ゼuvrD、rep、helDとはその近傍まで含めてよく保存されいることから、進化的な関連が示唆された。さらに、priAはCXXC配列が4個クラスタ-をなして現われる領域を持ち、Zinc‐finger用の構造を持つ可能性が示唆された。プラスミドから計11個の独立のn'サイトを単離し、その構造を比較した結果、一次構造の上から5つのグル-プに分類された。いずれも安定なヘアピン構造を形成しうるが、一次構造上ですべてに保存された配列は見い出されないことから、n'タンパク質はヘアピンの高次構造を認識していると推察された。染色体priA遺伝子を欠損した変異株を作成し、その抽出液を調製した結果、このものはのSSからRFへの複製及びColEI型のプラスミドであるpBR322DNA複製活性を有しておらず、その複製にはn'タンパク質の添加を必要とした。また、ニトロセルロ-スフィルタ-上に固定したn'タンパク質は、野生型のn'サイトとは結合するが、メチレ-ション保護の実験から接触ヌクレオチドと同定された部位に変異を持つn'サイトとは結合しないことが示された。現在、N端及びC端の欠失誘導体および、ヌクレオチド結合ドメインあるいはCXXCモチ-フの点変異体を作成し、これらの変異タンパク質の機能を上記のようにして確立されたアッセイ法を用いて測定している。

The priA gene is present at the 88.7-point position of the E. coli chromosome. The result of structural analysis, priA, is commonly preserved in both cases. In particular, GXGXXGKT contains three different types of E. coli before and after molecular weight 75kD: UvrD, rep, helD, etc., including the relationship between preservation and evolution. In addition, priA and CXXC are arranged in four different fields, and the structure of Zinc finger is possible. 11 independent n'structures are classified according to the results of comparison and classification. In the middle of the structure, the stability of the structure is determined. In the middle of the structure, the stability of the structure is determined. In the middle of the structure, the quality of the structure is determined. The DNA replication activity of pBR322 DNA is necessary for the production of mutant DNA with chromosome priA gene deficiency and for the preparation of mutant DNA. In addition to the above, the wild type has the ability to combine with the wild type and the wild type. Now, the N-terminal and C-terminal loss inducers are combined with the CXXC point variants, and the difference between the N-terminal and CXXC points is determined by the method described above.

项目成果

正井 久雄: "複製におけるDNA結合タンパク質" Cell Science. 7. 445-459 (1991)

Hisao Masai：“复制中的 DNA 结合蛋白”《细胞科学》7. 445-459 (1991)。

N Nomura,H.Masai,M.Inuzuka,C.Miyazaki,E.Ohtsubo,T.Itoh,S.Sasamoto,M.Matsui,R.Ishizaki and K.Arai: "Identification of eleven singleーstromd initiation sequences (ssi) for priming of DNA replication in F.R6k,R100 and ColE2 plasmids" Gene. 108. 15-22 (1991)

N Nomura、H. Masai、M. Inuzuka、C. Miyazaki、E. Ohtsubo、T. Itoh、S. Sasamoto、M. Matsui、R. Ishizaki 和 K. Arai：“11 个单链起始序列（ssi）的鉴定）用于在 F.R6k、R100 和 ColE2 质粒中启动 DNA 复制”Gene. 108. 15-22 (1991)

Hisao Masai,Yoshihisa Kubota,Kiyoatsu Umemura and Kenーichi Arai: "Functions of the φX174ーtype primosome and its primosomal proteins in plasmid and chromosomal replication" Journal of Cellular Biochemistry. Supplement16B. 94-94 (1992)

Hisao Masai、Yoshihisa Kubota、Kiyoatsu Umemura 和 Kenichi Arai：“φX174 型引发体及其引发体蛋白在质粒和染色体复制中的功能”《细胞生物化学杂志》增刊 94-94（1992 年）。