一本鎖DNAヘアピン構造を認識する複製タンパク質の構造と機能

识别单链DNA发夹结构的复制蛋白的结构和功能

• 批准号: 03259205
• 负责人: 正井 久雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259205/
• 关键词: DNA複製タンパク質; DNA結合タンパク質; ATP加水分解酵素; ATP結合タンパク質; DNAヘリカ-ゼ; 亜鉛結合タンパク質; 一本鎖DNAヘアピン

priA遺伝子は、大腸菌染色体88.7分の位置に存在し、これまでに同定されていない新しい遺伝子であることが明かとなった。一方、構造解析の結果、priAはヌクレオチド結合タンパク質に共通に保存されている2つのモチ-フを所有していることが示された。特にGXGXXGKTを含むモチ-フは大腸菌の分子量75kD前後の他の3つのヘリカ-ゼuvrD、rep、helDとはその近傍まで含めてよく保存されいることから、進化的な関連が示唆された。さらに、priAはCXXC配列が4個クラスタ-をなして現われる領域を持ち、Zinc‐finger用の構造を持つ可能性が示唆された。プラスミドから計11個の独立のn'サイトを単離し、その構造を比較した結果、一次構造の上から5つのグル-プに分類された。いずれも安定なヘアピン構造を形成しうるが、一次構造上ですべてに保存された配列は見い出されないことから、n'タンパク質はヘアピンの高次構造を認識していると推察された。染色体priA遺伝子を欠損した変異株を作成し、その抽出液を調製した結果、このものはのSSからRFへの複製及びColEI型のプラスミドであるpBR322DNA複製活性を有しておらず、その複製にはn'タンパク質の添加を必要とした。また、ニトロセルロ-スフィルタ-上に固定したn'タンパク質は、野生型のn'サイトとは結合するが、メチレ-ション保護の実験から接触ヌクレオチドと同定された部位に変異を持つn'サイトとは結合しないことが示された。現在、N端及びC端の欠失誘導体および、ヌクレオチド結合ドメインあるいはCXXCモチ-フの点変異体を作成し、これらの変異タンパク質の機能を上記のようにして確立されたアッセイ法を用いて測定している。

priA is missing, and coliform chromosome 88.7 points are present at the same position. On the one hand, the results of structural analysis, priA はヌクレオチド combined with タンパクqualityにKO Tongにsaveされている2つのモチ-フをallしていることがshowされた. Special GXGXXGKT containing むモチ-フは coliform molecular weight 75kD before and after 3つのヘリカ-ゼuvrD , rep, helD とはその near close まで contain めてよく to save されいることから, evolved なrelated connections が出款円された.さらに、priAはCXXC arrangement が4クラスタ-をなして出われる区をhold ち、Zinc-finger uses のstructure をhold つpossibility が说唆された.プラスミドから totals 11 independent のn'サイトを単利し, そのstructure を comparison した results, 1st construction の上から5つのグル-プに classify された.いずれも stabilized なヘアピンstructure をformed しうるが, once structured ですべてにsaved されたmatching arrangement は见い出されないことから、n'タンパク性はヘアピンのHigh-level structure をKnowing していると inferring された. Chromosome priA genetic material is defective and the heterogeneous strain is produced. The lEI-type DNA replication activity of pBR322 is not necessary, and the replication activity of pBR322 is necessary.また、ニトロセルロ-スフィルタ-上に Fixed したn'タンパク性は、Wild-type のn'サイトとは combined with するが、メチレ-ションprotects the parts that touch the ヌクレオチドと同定されたに変differentをholdつn'サイトとはcombinationしないことがshowsされた. Currently, the N-terminal and C-terminal deletion inducers are および and ヌクレオチド binding ドメインあるいはCXXC モチ-フのpoint variantしし、これらの変different タンパク性のfunctional を上记のようにしてEstablish the されたアッセイ法を Use いて to measure the している.

项目成果

正井 久雄: "複製におけるDNA結合タンパク質" Cell Science. 7. 445-459 (1991)

Hisao Masai：“复制中的 DNA 结合蛋白”《细胞科学》7. 445-459 (1991)。

N Nomura,H.Masai,M.Inuzuka,C.Miyazaki,E.Ohtsubo,T.Itoh,S.Sasamoto,M.Matsui,R.Ishizaki and K.Arai: "Identification of eleven singleーstromd initiation sequences (ssi) for priming of DNA replication in F.R6k,R100 and ColE2 plasmids" Gene. 108. 15-22 (1991)

N Nomura、H. Masai、M. Inuzuka、C. Miyazaki、E. Ohtsubo、T. Itoh、S. Sasamoto、M. Matsui、R. Ishizaki 和 K. Arai：“11 个单链起始序列（ssi）的鉴定）用于在 F.R6k、R100 和 ColE2 质粒中启动 DNA 复制”Gene. 108. 15-22 (1991)

Hisao Masai,Yoshihisa Kubota,Kiyoatsu Umemura and Kenーichi Arai: "Functions of the φX174ーtype primosome and its primosomal proteins in plasmid and chromosomal replication" Journal of Cellular Biochemistry. Supplement16B. 94-94 (1992)

Hisao Masai、Yoshihisa Kubota、Kiyoatsu Umemura 和 Kenichi Arai：“φX174 型引发体及其引发体蛋白在质粒和染色体复制中的功能”《细胞生物化学杂志》增刊 94-94（1992 年）。