新規DNA結合モチーフ"TTpocket"を有する機能タンパク質の探索

寻找具有新型 DNA 结合基序“TTpocket”的功能蛋白

• 批准号: 18657057
• 负责人: 正井 久雄
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657057/
• 关键词: PriAタンパク; 複製フォーク; DNA3'末端; DNA結合; X線構造解析; DNA結合タンパク質; 高次構造; ゲノム安定性; DNA末端; DNA複製; チェックポイント制御; PriAタンパク質

大腸菌PriAタンパク質は、停止した複製フォークを認識して結合する。PriAはN端180アミノ酸の領域にDNA結合ドメインを有し、停止複製フォークの構造を認識する。このDNA結合ドメインのN端側105アミノ酸内にDNA鎖の3'末端(three-prime terminus)を特異的に認識するポケット構造(TT pocket)が存在することを明らかにした。その高次構造をX線結晶構造解析で明らかにし、塩基配列非依存的な核酸末端の認識の構造的基盤を解明した。さらに、構造から予想される、核酸認識に重要なアミノ酸残基の置換により、3'末端認識が喪失した。現在これらの構造情報に基づき、同様な構造を有すると期待される構造をdata baseから探索することにより、他生物種、とくに真核細胞(動物細胞および分裂酵母)におけるTT pocketタンパク質の探索を行っている。また結合アッセイを用いて、in vitroにおける3'末端特異的な結合を指標に、期待される結合能を有するタンパク質の生化学的同定も行った。得られたタンパク質のMASS解析から、これらはヌクレオチド代謝に関与する酵素、およびアミノアシルtRNA合成酵素のひとつであった。これらは、いずれもヌクレオチドあるいは核酸に結合する酵素であり、DNA末端に依存した結合を示すことが説明される。現在、さらに結合活性を有する因子の探索をすすめている。また、PriA欠損株の機能相補を指標としたアッセイ系によるスクリーニングも計画している。また、PriA欠損株の機能相補を指標としたアッセイ系によるスクリーニングも計画している。

Escherichia coli PriAタ パ パ パ パ <s:1>, stop <s:1> た replication フォ <s:1> を を を recognize て て binding する. The 180 at the n-terminal of PriA ア ア ノ acid <s:1> domain にDNA binding ドメ <s:1> に を を を を has <s:1> and stops replication フォ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> the structure of <s:1> is understood する. こ の dna-binding ド メ イ ン の N end side 105 ア ミ ノ acid inside lock の に DNA 3 'end (three - prime terminus) を specific に know す る ポ ケ ッ ト structure (TT pocket) が す る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0 そ higher-order structure を X-ray crystallization structure analysis で clarification ら ら に を, basin-coordination non-dependent な nucleic acid terminal <e:1> understanding the base plate of the <s:1> structure を clarification of た. さ ら に, tectonic か ら to think さ れ る, nucleic acid に important な ア ミ ノ acid residues の replacement に よ り, 3 'end to know が loss し た. Now こ れ ら の structure intelligence に base づ き, with others in な a す を construction る と expect さ れ る tectonic を data base か ら explore す る こ と に よ り, he biological species, と く に eukaryotic cells (animal cell お よ び split yeast) に お け る TT pocket タ ン パ ク mass line の explore を っ て い る. ま た combining ア ッ セ イ を with い て, the in vitro に お け る 3 'end specific な に を index, expect さ れ る binding energy を have す る タ ン パ ク qualitative の biochemistry with fixed line も っ た. Have to ら れ た タ ン パ ク qualitative の MASS resolution か ら, こ れ ら は ヌ ク レ オ チ ド metabolic に masato and す る enzyme, お よ び ア ミ ノ ア シ ル tRNA synthetic enzyme の ひ と つ で あ っ た. こ れ ら は, い ず れ も ヌ ク レ オ チ ド あ る い は nucleic acid に combining す る enzyme で あ り, DNA end に dependent し た combining を shown す こ と が illustrate さ れ る. Now, さらに binding activity を has する factors さらに exploring をすすめて る る. ま た, PriA owe damage strain の functions fill phase を と し た ア ッ セ イ department に よ る ス ク リ ー ニ ン グ も project し て い る. ま た, PriA owe damage strain の functions fill phase を と し た ア ッ セ イ department に よ る ス ク リ ー ニ ン グ も project し て い る.

项目成果

Rad3-Cds1 mediates coupling of initiation of meiotic recombination with DNA replication : Mei4-dependent transcription as a potential target of meiotic checkpoint.

Rad3-Cds1 介导减数分裂重组起始与 DNA 复制的耦合：Mei4 依赖性转录作为减数分裂检查点的潜在目标。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Biol.Chem. 281
• 作者: Ogino;K.;Masai;H.
• 通讯作者: H.

Phosphorylation of MCM4 by Cdc7 kinase facilitates its interaction with Cdc45 on the chromatin

• DOI: 10.1074/jbc.m608935200
• 发表时间: 2006-12-22
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Masai, Hisao;Taniyama, Chika;Arai, Ken-ichi
• 通讯作者: Arai, Ken-ichi

Escherichia coli PriA protein, two modes of DNA binding and activation of ATP hydrolysis

• DOI: 10.1074/jbc.m701848200
• 发表时间: 2007-07-06
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Tanaka, Taku;Mizukoshi, Toshimi;Masai, Hisao
• 通讯作者: Masai, Hisao

"UVクロスリンキング法"「分子間相互作用解析ハンドブック」

《UV交联法》《分子相互作用分析手册》

• 发表时间: 2007
• 作者: You Zhiying;正井 久雄
• 通讯作者: 正井 久雄

染色体サイクル(Cdc7キナーゼによる複製フォーク制御"実験医学増刊号)

染色体周期（Cdc7激酶控制复制叉”实验医学特刊）

• 发表时间: 2007
• 作者: 正井久雄;松本清治
• 通讯作者: 松本清治