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複製終結点付近に見られる高頻度相同的組換え機構

在复制终止点附近观察到的高频同源重组机制

基本信息

批准号：
04262211
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

相同的組換え機構の解明には、その頻度が上昇した組換えのホットスポットの解析が有効と思われる。このことは、自然突然変異の機構解明にミューテーターの果たした役割を考えれば明かであろう。我々は大腸菌のRNaseH欠損変異株において、特に顕著に上昇するホットスポットを見いだし、解析を進めきた。具体的には、計8ケ所のホットスポット(HotA-H)は、一つを除き複製終結領域に有ること、調べた全てが、大腸菌の組換えホットスポットとして既に知られているChi活性を有していること、その内の3ケは、複製終結反応に依存すること、少なくともHotA活性はChi配列にも依存することを明らかにした。本年度は、(1)Hot活性は野性株においても、検出できるか?(2)Hot活性は真に組換え活性を反映しているか?について調べた。(1)野性株においても、そのHot活性はRNaseH変異株に較べると低いものの認められた。しかもその活性も終結反応とChi配列に依存していた。このことは、この現象が、通常起こっていることを示唆している。(2)最近他研究者から、特殊な系ではあるものの、Chi配列を有するDNA断片が、ローリングサークル型複製により増幅する結果が報告された。我々の系においても、もし同様なことが起れば、これまでのモデルは崩壊する。つまりHot活性は組換えでなく、複製能を反映していることになる。これについて調べた。方法としては、1)HotAのChi配列を共に破壊し、2)HotAと複製終結点(TerB)との間に、新しいChi配列(両方向)を挿入した。その結果、HotA自身にChi配列が無くても、その外に新しく挿入したChi配列(元と同方向)があれば、HotA活性が回復することが判明した。以上の結果から、これまで不明であった、環状染色体上のRecBCD酵素の侵入口の一つが、複製終結点であることがほぼ確かとなった。

The frequency of the same set of mechanisms is increasing. This is a sudden change in the natural structure of the solution to the problem. We are looking forward to the future development of E. coli RNase H. The specific information is as follows: (1) The total number of copies of the virus (HotA-H), the total number This year,(1)Hot activity, wild plants, wild plants (2)Hot activity is true, the activity is true, and the activity is true.について调べた。(1)Wild plants have high activity and low activity. The activity of the terminal is dependent on the allocation of Chi. The phenomenon of (2)Recently, other researchers have reported the results of DNA fragmentation and DNA replication in special strains. I'm not going to be able to do that. The activity of hot water is changed, and the replication energy is reflected.これについて调べた。Methods: 1)HotA's Chi Collocations are broken; 2)HotA's Replication Endpoints (TerB) are broken; New Chi Collocations are broken; As a result, HotA's own Chi allocation is not available, and the new Chi allocation (in the same direction) is not available, and HotA activity is restored. The above results are unknown, the entry point of RecBCD enzyme on the ring chromosome is unknown, and the replication endpoint is unknown.