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相同的組換えの活性化点とその活性化機構の研究

同源重组激活点及其激活机制研究

基本信息

批准号：
62218010
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62218010/
关键词：
大腸菌相同的組換え RNaseH X配列複製終結点(terc)λファージ

项目摘要

従来より, 相同的組換えは染色体全体に均等にではなく, 局在化して起こることが観察されてきた. この現象に対する分子レベルでの実験的根拠としてλファージのX(カイ)配列がある. このX配列(5-GCTGGTGGT-3)はλファージ上でその前後約10KbのDNAの相同的組換えを活性化し, 極性を有することが知られている. 一方我々は最近大腸菌のRNaseH欠損変異株を解析する過程で, この株特異的に活性化する相同的組換え点の存在を示唆する以下の様な結果を得た. つまり染色体DNA断片中には, 自律複製能のないK^r_mDNA断片と結合し, 環状DNAとしてRNaseH欠損株にトランスフォーメーションした場合, それが染色体に組込まれたもの以外に, 逆に組換えで再度プラスミド状DNAとして回収されるもの(環状化活性)があることを見出した. 当初このDNA断片には自律複製能があると考え, 誤ってoriHと名付けたが, 分離した8種のoriHDNA断片のうち7種が複製終結点(terC)領域に位置していた. 本研究では, oriHDNAを含め, terc領域(〜300Kb)全域から, 20種以上のDNA断片を選択し, RNaseH欠損株中での「環状化活性」と同時にλファージ上での「X活性」の有無を調べ, 両者の関係を明らかにしようとした. その結果, 環状活性(+)の10種のうち1種を除き全てX活性(+)であったが, 環状化活性(-)のもの12種のうち, X活性(+)5種, (-)7種と分離した. またX活性(+)の8種のうち, 5種が極性を示し, 残りは両方向性を示した. さらに以上のX活性の程度は, 既知のそれとほぼ等しいこと, 宿主がRNaseH欠損株であろうとなかろうと, その活性に変化がないこと, 環状化活性(+)の1クローンの塩基配列を決定したところ, X配列が予想通りの向きで見出されたこと等から, 環状化活性点は, X配列又はX様配列でありRNaseH欠損下では, terc領域に比較的局在するそれらがなんらかの機構で活性化されると考えられる.

The same group of chromosomes is equal to all chromosomes, and the situation is changing. The molecular structure of this phenomenon is the root of the problem. The X sequence (5-GCTGGT GGT-3) was activated by the same 10Kb DNA sequence before and after the λ_(1) sequence, and the polarity of the sequence was determined. A recent analysis of E. coli RNase H deficient mutants showed the presence of the same sites of activity in the plant-specific mutants and the following results. In addition to chromosome DNA fragments, self-replicating DNA fragments can bind to circular DNA fragments, and cyclic DNA fragments can bind to DNA fragments. DNA fragments can replicate autonomously, and 8 kinds of oriH DNA fragments can be isolated. 7 kinds of oriH DNA fragments can replicate at terC. In this study, more than 20 DNA fragments were selected from oriH DNA, including terc domain (~ 300Kb), and the "circularization activity" and the presence or absence of "X activity" in RNase H deficient plants were modulated. As a result, there are 10 kinds of cyclic activity (+), 1 kind of total activity (+), 12 kinds of cyclic activity (-), 5 kinds of X activity (+), 7 kinds of isolation (-). 8 kinds of X activity (+), 5 kinds of polarity and residual directivity are shown. The degree of X activity is determined by the degree of X activity, the degree of X activity is determined by the degree of X activity. terc field comparison bureau in the field of activity.