染色体GC含量を制御するミューテーター遺伝子(mutT)の分子遺伝学的研究

控制染色体GC含量的突变基因（mutT）的分子遗传学研究

• 批准号: 62618506
• 负责人: 堀内 嵩
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62618506/
• 关键词: 大腸菌; ミューテーター; GC含量; DNA複製; DNAポリメラーゼ; トランスバージョン

我々は最近大腸菌のA:TからC:Gへの特異的なトランスバージョン型の自然突然変異の生成を抑制しているmutT遺伝子の産物を同定したが, 本研究ではそれが既知タンパク質であるか否かを検証した. 以前より直接的な証拠はないもののmutTタンパク質は, DNAポリメラーゼIIIのサブユニットの一つである可能性が示唆されてきた. 特にDNAポリメラーゼIIIの核となるコア酵素は, α, ε, θの3つのサブユニットで構成されており, すでにαとεサブユニットは, それぞれdnaEとdnaθ遺伝子の産物であることが判明し, その変異体は共に強いミューテーダーであることが知られている. そこで我々はクローン化したmutT遺伝子を用いてその産物が残るθサブユニット(10Kダルトン)と同一か否かを厳密に検証しようとした. (1)クローン化したmutT遺伝子の塩基配列から予報されるその産物の分子量は, 15Kダルトンであるが, 用いられる開始コドンの位置の決定が必要である. そのため, 第一番目の開始コドン(この場合の産物が15Kダルトン)を人工合成したDNA利用した変異導入法で不活化したところ, mutT遺伝子の活性が消失したことから, このATGがmutT遺伝子の開始コドンと結論した. (2)mutTタンパク質を単一バンドまで精製し, それに対する抗体を作製した. 現在この抗体が大腸菌DNAポリメラーゼIII複合体に含まれるサブユニットと反応するか否かを検討中である. 結論はこれを待たねばならないが, これまでの結果は, mutTタンパク質は, θサブユニットではないことを強く示唆している.

Recently I 々 は coliform の A: T か ら C: G へ の specific な ト ラ ン ス バ ー ジ ョ ン の type natural suddenly - different の を inhibition of し て い る mutT heritage 伝 son を の products with fixed し た が, this study で は そ れ が already know タ ン パ ク qualitative で あ る か no か を 検 card し た. Card before よ り direct な 拠 は な い も の の mutT タ ン パ ク は, DNA ポ リ メ ラ ー ゼ III の サ ブ ユ ニ ッ ト の a つ で あ が る possibility in stopping さ れ て き た. Special に DNA ポ リ メ ラ ー ゼ の III nuclear と な る コ ア enzyme は, alpha, epsilon, theta の 3 つ の サ ブ ユ ニ ッ ト で constitute さ れ て お り, す で に alpha と epsilon サ ブ ユ ニ ッ ト は, そ れ ぞ れ dnaE と traces of DNA theta 伝 son の product で あ る こ と が determine し, Strong そ の - variant は altogether に い ミ ュ ー テ ー ダ ー で あ る こ と が know ら れ て い る. そ こ で I 々 は ク ロ ー ン change し た mutT heritage 伝 son を with い て そ の product が residual る theta サ ブ ユ ニ ッ ト (10 k ダ ル ト ン) と whether the same か か を 厳 dense に 検 card し よ う と し た. (1) ク ロ ー ン change し た mutT posthumous son 伝 の salt base with column か ら forecast さ れ る そ の product の は molecular weight, 15 k ダ ル ト ン で あ る が, use い ら れ る began コ ド ン の position の decided が necessary で あ る. そ の た め, The beginning a mesh の コ ド ン (こ の occasions の product が 15 k ダ ル ト ン) を synthetic し た DNA using し た - different import law で activation し た と こ ろ, mutT heritage が 伝 の son disappeared し た こ と か ら, こ の ATG が mutT heritage 伝 の started コ ド ン と conclusion し た. (2) the mutT タ ン パ ク qualitative を 単 a バ ン ド ま で refined し そ れ に す seaborne る antibody を cropping し た. Now こ の antibody が coliform DNA ポ リ メ ラ ー ゼ III complex contains に ま れ る サ ブ ユ ニ ッ ト と anti 応 す る か no か を 検 beg in で あ る. Conclusion は こ れ を stay た ね ば な ら な い が, こ れ ま で は の results, mutT タ ン パ ク は, theta サ ブ ユ ニ ッ ト で は な い こ と を く and shown strong sucking し て い る.

项目成果

秋山 昌広: Molecular and General Genetics. 206. 9-16 (1987)

秋山正宏：分子和普通遗传学。206. 9-16 (1987)