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染色体GC含量を制御するミューテーター遺伝子(mutT)の分子遺伝学的研究

控制染色体GC含量的突变基因（mutT）的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
62618506
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62618506/
关键词：
大腸菌ミューテーター GC含量 DNA複製 DNAポリメラーゼトランスバージョン

项目摘要

我々は最近大腸菌のA:TからC:Gへの特異的なトランスバージョン型の自然突然変異の生成を抑制しているmutT遺伝子の産物を同定したが, 本研究ではそれが既知タンパク質であるか否かを検証した. 以前より直接的な証拠はないもののmutTタンパク質は, DNAポリメラーゼIIIのサブユニットの一つである可能性が示唆されてきた. 特にDNAポリメラーゼIIIの核となるコア酵素は, α, ε, θの3つのサブユニットで構成されており, すでにαとεサブユニットは, それぞれdnaEとdnaθ遺伝子の産物であることが判明し, その変異体は共に強いミューテーダーであることが知られている. そこで我々はクローン化したmutT遺伝子を用いてその産物が残るθサブユニット(10Kダルトン)と同一か否かを厳密に検証しようとした. (1)クローン化したmutT遺伝子の塩基配列から予報されるその産物の分子量は, 15Kダルトンであるが, 用いられる開始コドンの位置の決定が必要である. そのため, 第一番目の開始コドン(この場合の産物が15Kダルトン)を人工合成したDNA利用した変異導入法で不活化したところ, mutT遺伝子の活性が消失したことから, このATGがmutT遺伝子の開始コドンと結論した. (2)mutTタンパク質を単一バンドまで精製し, それに対する抗体を作製した. 現在この抗体が大腸菌DNAポリメラーゼIII複合体に含まれるサブユニットと反応するか否かを検討中である. 結論はこれを待たねばならないが, これまでの結果は, mutTタンパク質は, θサブユニットではないことを強く示唆している.

I have recently developed a specific type of coliform A:TからC:Gのnatural sudden change のgeneration をinhibition しているmutT 伝子のproduct を同定したが, This study is based on the known タンパク性であるか不かを検证した. In the past, it was a direct な证拠はないもののmutTタンパク性は, DNA ポリメラーゼIII のサブユニットの一つであるpossibility がshows instigation されてきた.特にDNAポリメラーゼIIIのuclease enzyme, α, ε, θの3つのサブユニットで constitutes されており, すでにαとεサブユニットは,それぞれdnaEとdnaθ弝子の Product であることが clarified し,その変物は公に强いミューテーダーであることが知られている.そこで我々はクローン化したmutT伝子を用いてそのproductが residualるθサブユニット(10K ダルトン)と同不かを厳综合に検证しようとした. (1) クローン化したmutT 伝子の塩婩综合から出されるその Product の molecular weight は, 15K ダルトンであるが, Use いられる to start the コドンの position and determine the necessary である. そのため, The first part of the project begins with the product of 15K ダルトン, the artificial synthesis of DNA using the heterogeneous introduction method and the inactivation of 15K, mutT伝子のActivity disappearsしたことから, このATGがmutT伝子のstartsコドンと Conclusionした. (2)mutTタンパクqualityを単一バンドまでRefinedし,それに対するAntibodyをした. Now the antibody of coliform DNA ポリメラーゼゼIII complex contains まれるサブユニットとanti-reaction するかNo かを検検中である. Conclusionはこればたねばならないが,これまでのRESULTは, mutTタンパクqualityは, θサブユニットではないことを强くshow憆している.