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染色体GC含量を制御するミューテーター遺伝子(mutT)の分子遺伝学的研究

控制染色体GC含量的突变基因（mutT）的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
63618510
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

生物界に存在するゲノムDNAのGC含量は、広い範囲(25%〜75%)に分布している。しかし進化の過程における、この大きなGC含量の変動の要因については現在でも未知のままである。我々はこの要因の一つとして考えられる大腸菌ミューテーター(mutT)遺伝子の解析を進めてきた。というのは、このミューテーターは、A:T→C:Gへの一方向のトランスバージョン型変異のみを上昇させるからである。実際、mutTミューテーターの長時間培養により、染色体のGC含量が増加することが確かめられている。我々は、このMutTタンパク質の酵素活性を同定することから、A:T→C:Gへの特異的なトランスバージョン変異生成の分子レベルでの機構を知ることができると考えた。そのため、mutT遺伝子をクローニングし、その遺伝子構造を明らかにするとともに、MutTタンパク質を過剰生産し、精製を行い、その酵素試料を用いて以下の生化学的解析を行った。上記トランスバージョン変異生成の中間体としては、dA:dGミスマッチ塩基対が予想される。実際、立体異性体のanti型dAMPとsyn型dGMPは、ワトソン-クリック型塩基対合を形成しうるとするモデルが提出されている。このミスマッチをDNAポリメラーゼIII酵素が形成しうるか否かを調べた。テンプレートにpoly(dA)、プライマーにpoly(dT)、基質としてdGTPのみを用いると、低頻度ながらdGMPの取り込みが認められた。驚いたことに、この取り込みが、精製したMutTタンパク質の添加によって完全に抑制された。さらにMutTタンパク質が、dGTPase活性を有することも見出した。現在、MutTタンパク質が、dGTPの立体構造(anti型とsyn型)を認識し、syn型を特異的に分解していると考えており、今後その検証を行いたい。

The GC content of DNA in organisms varies widely (25%~ 75%). The evolution of GC content is due to the change of GC content. The main reason for this is that the analysis of E. coli (mutT) is carried out. A:T → C:G → C: G → C: G: G →C:G →C:G: G: G → G: G: G: In fact, mutT gene expression increased during long-term culture, and the GC content of chromosomes increased. A: T→C:G → A: T→C: G → A:T→ C → C → G → A:T→C → G → C → G → G →The following biochemical analysis was carried out in the production, purification and use of enzyme samples. Note that the above reaction is different from the production of intermediate, dA:dG reaction is different from the production of intermediate. In fact, anti-type dAMP and syn-type dGMP of stereoisomers are formed in the presence of a solid-type matrix. This is the first time that I've seen this. Poly(dA), poly(dT), matrix, low frequency, low frequency, low frequency In addition, the quality of the product is completely suppressed. Mutterin is present in the presence of dGTase. At present, MutT