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多面的機能を有するDNA複製終結点結合タンパク質の構造解析

具有多效性功能的DNA复制终止点结合蛋白的结构分析

基本信息

批准号：
02263210
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌の複製終結点結合タンパク質は、染色体上にある特異的な22bpからなる終結点配列を認識、結合するだけではなく、生じた複合体がその部位において、接近する複製フォ-クの進行を阻止するという他のDNA結合タンパク質には見られない特異な活性を表す。本タンパク質が示すこの二つの活性(DNA結合活性と複製フォ-ク阻害性)がいかなるポリペプチドに担われており、どの様にしてその活性を表すかは興味あるところであり、本研究の主題である。この複製フォ-ク阻害活性は,複製フォ-クを構成する多種のタンパク質のうちDNAヘリカ-ゼ活性の阻害によることを明かにしてきたが、他のグル-プの結果と一部矛盾したこともあり、本年度はこれを再度確かめた。そのため大腸菌とは異なる系、つまり真核生物の系を用い確かめることとした。系としては、SV40DNAの試験管内複製系である。基質のSV40DNAに終結点配列を挿入し、反応液に終結点結合タンパク質を添加したところ、酵素試料として、租抽出液あるいは精製標品いずれを用いても、明らかな終結点での複製フォ-ク進行の阻害が観察された。さらに終結点とその結合タンパク質の複合体は、SV40のlargeT抗原の有するヘリカ-ゼ活性を特異的に阻害することも解った。以上のことから、大腸菌の終結システムが、真核生物の系でも同様に有効であること、複製フォ-ク進行の機構が原核、真核問わず基本的には同じであること、さらにフォ-ク阻害の標的が間違いなくDNAヘリカ-ゼそのものであることが明かとなった。以上の研究以外に,共同研究として,このタンパク質の結晶化の試みまた枯草菌の類似タンパク質の一次元構造の比較から、ドメイン構造の理論的推論を現在進めている。

E. coli replication endpoint binding protein, chromosome specific 22bp endpoint alignment recognition, binding, production complex, all parts of the site, access to replication-to prevent the progress of other DNA binding protein, see the specific activity. The activity of the two substances (DNA binding activity and replication resistance) in the present study is the subject of this study. The replication of this gene is a complex process, and the replication of this gene is a complex process. E. coli and eukaryotic organisms SV40 DNA was cloned in vitro. The SV40 DNA termination point alignment in the matrix, the reverse phase, the termination point binding, the addition of the enzyme sample, the extraction, the purification, the detection of the termination point. The binding protein complex of SV40 and SV40 is a specific inhibitor of SV40 activity. The above is the same for E. coli and eukaryotic organisms. The same for prokaryotic and eukaryotic organisms. The same for replication. The same for eukaryotic organisms. The same for eukaryotic and prokaryotic organisms. The same for DNA and eukaryotic organisms. In addition to the above research, we will jointly study the crystallization of these materials and compare them with the one-dimensional structures of similar materials in the field of Bacillus subtilis, and make progress in the theoretical deduction of these structures.