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多面的機能を有するDNA複製終結点結合タンパク質の構造解析

具有多效性功能的DNA复制终止点结合蛋白的结构分析

基本信息

批准号：
02263210
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌の複製終結点結合タンパク質は、染色体上にある特異的な22bpからなる終結点配列を認識、結合するだけではなく、生じた複合体がその部位において、接近する複製フォ-クの進行を阻止するという他のDNA結合タンパク質には見られない特異な活性を表す。本タンパク質が示すこの二つの活性(DNA結合活性と複製フォ-ク阻害性)がいかなるポリペプチドに担われており、どの様にしてその活性を表すかは興味あるところであり、本研究の主題である。この複製フォ-ク阻害活性は,複製フォ-クを構成する多種のタンパク質のうちDNAヘリカ-ゼ活性の阻害によることを明かにしてきたが、他のグル-プの結果と一部矛盾したこともあり、本年度はこれを再度確かめた。そのため大腸菌とは異なる系、つまり真核生物の系を用い確かめることとした。系としては、SV40DNAの試験管内複製系である。基質のSV40DNAに終結点配列を挿入し、反応液に終結点結合タンパク質を添加したところ、酵素試料として、租抽出液あるいは精製標品いずれを用いても、明らかな終結点での複製フォ-ク進行の阻害が観察された。さらに終結点とその結合タンパク質の複合体は、SV40のlargeT抗原の有するヘリカ-ゼ活性を特異的に阻害することも解った。以上のことから、大腸菌の終結システムが、真核生物の系でも同様に有効であること、複製フォ-ク進行の機構が原核、真核問わず基本的には同じであること、さらにフォ-ク阻害の標的が間違いなくDNAヘリカ-ゼそのものであることが明かとなった。以上の研究以外に,共同研究として,このタンパク質の結晶化の試みまた枯草菌の類似タンパク質の一次元構造の比較から、ドメイン構造の理論的推論を現在進めている。

The combination of the replication point of the giant fungus and the 22bp of the specific gene on the chromosome is arranged with the identification, the combination of the gene, the location of the complex of the gene, the location of the complex of the gene, and the close to the copy of the virus. To prevent the replication of the virus, the DNA is used to bind the activity of the gene. The results of this study show that the bivalent activity (DNA combined activity, replication-inhibition) is very important. This study focuses on the main topic of this study. Copy-block activity, copy-block activity, copy-block activity Please make sure that you are not in the family of bacteria, eukaryotes and eukaryotes. It is the first time to copy in the tube of the SV40DNA virus. The basic SV40DNA test point is equipped with the input point, the reverse phase point and the combination of the two points to add the enzyme concentration, enzyme feed, rental extract, precision label, and so on. The detection of the target product is performed by the use of the filter, and the detection is performed by the copy of the filter. The antigens of SV40 antigen largeT and SV40 antigens, which have the characteristics of antigenicity and antigenicity, can be detected by the combination of antigens and antigens. The abovementioned antifungal DNA, eukaryote, eukaryotic, eu In addition to the above research, we have jointly studied the results of crystallization. The type of Bacillus subtilis is similar to that of primary comparison, and the theory of engineering is now in progress.