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単一遺伝子病における組織特異的発現異常の研究

单基因疾病组织特异性表达异常的研究

基本信息

批准号：
05253216
负责人：
服巻保幸
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

時期特異的な発現異常、また発現亢進に基づく単一遺伝病のモデルとして、遺伝性高胎児ヘモグロビン血症(HPFH)の解析をさらに進めた。まず我々が見いだしたHPFH変異はgammaグロビン遺伝子の遠位CCAAT box内-114C-Tであるが、この近傍には-117G-A,CCAAT boxを含む13bpの欠失変異が報告されている。そこで-114変異と共にこれらの変異を持つプロモーターをCAT遺伝子に連結し、K562細胞とKU812細胞に導入後、CAT活性を測定した。その結果、近位および遠位CCCAAT boxは胎児期は正に、また成体期には近位CCCAAT boxは正に、一方遠位CCCAAT boxは負に働いていることが示唆された。個体発生に伴う遺伝子発現の異常を検討するために、正常または変異gammaグロビン遺伝子とbetaグロビン遺伝子とをタンデムにつないだ遺伝子を用いてトランスジェニックマウスを作成し、グロビン遺伝子の発現を解析した。これによると、正常gammaグロビン遺伝子は胎生期13日でbetaグロビン遺伝子に発現をシフトするが、-114変異では高いまま維持されることがわかった。またK562細胞の核抽出液を用いたgel shift assayを行ない、上記3種類変異においてNF-E3の結合が低下していることを見いだした。さらにDNAase footprinting法、methylation interference法によりNF-E3とCP-1とが遠位CCAAT boxについて排他的な関係にあることを明らかにした。以上から胎児期では遠位CCAAT boxにCP-1が結合し、gammaグロビン遺伝子の発現をONにしているが、成体期には代わってNF-E3が結合し、これが近位CCAAT boxへのCP-1の結合も阻害しgammaグロビン遺伝子の発現を抑制しているものと考えられた。従って、HPFHでは近位CCAAT boxの変異のためにNF-E3の結合が抑制され、gammaグロビン遺伝子の発現が成体期でも維持されているものと推測された。

The analysis of time-specific abnormalities, hyperactivity, genetic disorders, and genetic high fetal mortality (HPFH) is ongoing. HPFH is different from gamma, and CCAAT box contains 114C-T and 117G-A. CAT activity was measured after introduction into K562 cells and KU812 cells. The result is that the CCCAAT box in the proximal position is negative, and the CCCAAT box in the distal position is negative. The abnormal detection of individual development companion gene occurrence is discussed, and the normal one is analyzed. The gamma mutation gene and beta mutation gene are used to create and analyze the occurrence of gamma mutation gene. The normal gamma rays are present on the 13th day of gestation, and the beta rays are present on the-114th day of gestation. K562 cell nuclear extract was tested by gel shift assay. DNAase footprinting method, methylation interference method, NF-E3, CP-1, remote CCAAT box, exclusive relationship, etc. In the fetal period, CP-1 binding in the distant CCAAT box was inhibited by NF-E3 binding in the adult period, while CP-1 binding in the near CCAAT box was inhibited by gamma protein protein. The variation of NF-E3 binding in the CCAAT box of HPFH and HPFH is predicted to be inhibited and maintained in adulthood.