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内皮細胞由来過分極因子の精製・同定とその病態生理的意義

内皮细胞源性超极化因子的纯化、鉴定及其病理生理意义

基本信息

批准号：
05256209
负责人：
後藤淳郎
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血管内皮細胞から、過分極因子(EDHF)が実際に産生されるか否かを検討し、さらにそれを同定することが目的である。種々の平滑筋細胞および血管内皮細胞を単離し、その電気的性質を調べるとともに、血管内皮細胞を種々のagonistで刺激した時の血管平滑筋の膜電位の変化を検討した。ラット大動脈平滑筋細胞(A7r5)は-45mVの静止膜電位を有し、L型Ca電流が同定された。Vasopressin(AVP)はA7r5においてV_1受容体を介して、K電流および非選択性陽イオンチャネルを活性化すること、前者は細胞内IP_3による細胞内Ca増加によるが、後者は別の機構によると考えられた。同様の作用がendothelinにおいても観察された。モルモット肺動脈をコラゲナーゼ処理することにより単離血管平滑筋細胞を作成した。細胞はnoradrenalineにより収縮し、-45--55mVであった。自発的な活動電位の発生は見られなかった。EDHFについての検討はウシ肺動脈内皮細胞のcell lineをまいた記録槽に単離したA7r5あるいはラット肺動脈平滑筋細胞をまき種々のagonist(acetylcholine,bradykinin)を投与し、平滑筋細胞の膜電位に及ぼす効果を検討した。さらにラットの内皮を含む大動脈を摘出し、管腔内に種々のagonistを潅流し、その潅流液を単離血管平滑筋細胞に投与した時の膜電位の変化を記録した。今回用いたagonistおよび平滑筋細胞などの実験条件では、内皮細胞の共存の有無により明らかなEDHFの存在を示唆する所見は得られなかった。今後、実験条件の変更などさらに詳細に検討する必要があると思われた。

Vascular endothelial cell apoptosis and hyperpolarization factor (EDHF) are produced in real time. We investigated the changes in the membrane potential of smooth muscle cells in blood vessels when smooth muscle cells and vascular endothelial cells were isolated, the properties of the electric current were adjusted, and the vascular endothelial cells were stimulated by agonists. The resting membrane potential of the smooth muscle cells (A7r5) was-45mV and the L-type Ca current was constant. Vasopressin(AVP) is activated by A7r5 receptor V1, K current and non-selective cation, the former by intracellular IP3, the latter by intracellular Ca increase, and the latter by other mechanisms. The same effect is observed in endothelin. The blood vessels are smooth and smooth. Cell noradrenaline contraction,-45--55mV Self-generated activity potential is generated. EDHF is used to investigate the cell line of pulmonary endothelial cells and the effects of agonist(acetylcholine,bradykinin) on smooth muscle cells. The membrane potential of the endothelial cells was recorded when the cells were isolated from the vascular smooth muscle cells. In this paper, we use agonist and smooth muscle cells to detect the presence or absence of endothelial cells, and to detect the presence of EDHF. In the future, the conditions of the project will be changed and detailed discussions will be held.