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血管平滑筋及び内皮に発現する新しいG蛋白質共役型受容体の機能の解析

血管平滑肌和内皮表达的新型G蛋白偶联受体的功能分析

基本信息

批准号：
05256211
负责人：
多久和陽
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05256211/
关键词：
G蛋白共役型受容体血管血管平滑筋血管内皮 cDNA クローニング

项目摘要

G蛋白共役型受容体スーパーファミリーの中で比較的保存性の高い第3及び6膜貫通領域をコードするオリゴヌクレオチドプライマーを用いたPCR、大動脈平滑筋細胞cDNAライブラリーのハイブリダイゼーションスクリーニングにより新しいG蛋白共役型受容体をコードすると考えられるcDNAクローン(AGR16と命名)をクローニングした。AGR16は352アミノ酸からなる蛋白をコードし、細胞膜貫通領域を構成すると考えられる7個の疎水性領域を有する。ノーザンブロット解析によりAGR16遺伝子は心、肺、大動脈及び消化管に発現していることが明らかになった。コンピューターによるホモロジー検索の結果、AGR16と約50%のアミノ酸配列の相同性を有する受容体cDNAクローン(EDG-1)がヒトさい帯血管内皮細胞に発現していることが分かった。そこで次にラットEDG-1のcDNAクローニングを試みた。まず、PCR法によりヒトさい帯血管内皮cDNAより、ヒトEDG-1 cDNAの部分クローンを得、これをプローブとして用いラット肺cDNAライブラリーをスクリーニングし、ラットEDG-1の全長をコードするクローン(rEDG-1)を得た。rEDG-1は383アミノ酸からなる蛋白をコードし、G蛋白共役型受容体の特徴を有する。rEDG-1は脳、心、肺、消化管、副腎に発現する。培養細胞を用いた検討ではAGR16は大動脈平滑筋、心筋細胞に、EDG-1は静脈内皮、大動脈平滑筋、心筋細胞に発現していることがみいだされた。AGR16、rEDG-1、cDNAをCOS-7、Ltk^-細胞に発現させ、種々の生理活性物質に対するサイクリックAMP、イノシトールリン酸の反応を調べた。しかし、現在のところAGR16、rEDG-1受容体を活性化するリガンドをみいだしていない。

G protein co-active receptor is relatively conserved in the third and sixth membrane penetration domains. PCR, smooth muscle cell cDNA, AGR16, are used to examine the new G protein co-active receptor. AGR16 has 7 water-soluble domains, including 352 amino acids and 7 membrane-penetrating domains. The heart, lungs, aorta and digestive tract are found in the AGR16 gene. As a result of the study of the expression of AGR-16, there is a receptor cDNA (EDG-1) with about 50% identity of the amino acid sequence in vascular endothelial cells. EDG-1 cDNA library was developed in the first place. PCR was used to detect cDNA fragments from the endodermis of blood vessels, partial cDNA fragments from EDG-1 cDNA fragments, and partial cDNA fragments from rEDG-1 cDNA fragments. rEDG-1 has 383 amino acid residues and G protein co-active receptor characteristics. rEDG-1 occurs in the heart, lungs, digestive tract and accessory kidneys. AGR-16, EDG-1, and vascular smooth muscle, cardiac muscle cells were found in cultured cells. AGR16, rEDG-1, cDNA COS-7, Ltk^-cell production, seed physiologically active substances for the regulation of protein metabolism In the present case, AGR16 and rEDG-1 are active receptors.