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血管内皮の産生する生理活性ペプチドエンドセリン-1の血管平滑筋作用機構の研究

血管内皮产生的生物活性肽内皮素1对血管平滑肌的作用机制研究

基本信息

批准号：
04263211
负责人：
多久和陽
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ETA受容体、ETB受容体を発現する種々の細胞を用いて、両受容体を介するPLC活性化、PLA2活性化、Ca^<2+>動員機構について検討した、ET-1は培養大動脈平滑筋細胞A10細胞、Swiss3T3線維芽細胞のETA受容体に作用しPLC活性化、細胞内Ca^<2+>の2相性変化を引き起こす。細胞膜透過処理をほどこしたA10細胞を用いた検討では、ET-1によるイノシトールリン酸産生はGTPrSに強く依存し、 ^<125>I-ET-1の受容体への結合はGTPrSによって農度依存性に抑制された。A10細胞、Swiss3T3線維芽細胞膜には百日咳毒素によりADP-リボシル化される約41kDaの蛋白質が存在するが、いずれの細胞においてもET-1によるPLC活性化は百日咳毒素により抑制されなかった。ET-1はA10細胞、Swiss3T3細胞、ROS17/2細胞においてETA、或はETB受容体を介してアラキドン酸放出を引き起こし、この反応はPLA2阻害剤メパクリンの感受性であった。Swiss3T3細胞ではET-1によるPLA2活性化は2相性であり、第1相(最初の約1分)は細胞内Ca^<2+>動員に依存した。一方、第2相(2分以後)はCキナーゼ及び細胞膜を介するCa^<2+>流入に依存した。ETA受容体を発現するA10細胞及びSwiss3T3細胞とは異なり、ETB受容体を発現するROS17/2細胞ではPLA2活性化の60〜70%は百日咳毒素により抑制された。ET-1はETA受容体を発現するA10細胞、Swiss3T3細胞,Y-1細胞、ETB受容体を発現するROS17/2細胞のいずれにおいても細胞膜を介するCa^<2+>流入を促進する。A10、Swiss3T3、ROS17/2細胞では、ET-1によるCa^<2+>流入はジヒドロピリジンCa拮抗剤非感受性であった。これらの細胞とは異なり、Y-1細胞はL型電位依存性Ca^<2+>チャンネルを発現する。K^+刺激やBAYK8644によるCa^<2+>流入はジヒドロピリジンCa拮抗剤により抑制されるが、ET-1によるCa^<2+>流入はA10細胞、Swiss3T3細胞と同様にジヒドロピリジンCa^<2+>拮抗剤非感受性であった。

ETA receptor, ETB receptor development, PLC activation, PLA2 activation, Ca^<2+> mobilization mechanism, ET-1 smooth muscle cell A10 cells, Swiss 3T3 line bud ETA receptor, PLC activation, intracellular Ca^<2+> and biphasic transformation. Cell membrane permeability is enhanced by the use of A10 cells, and ET-1 receptor binding is strongly dependent on GTPrS, <125>while ET-1 receptor binding is strongly inhibited by GTPrS. A10 cells, Swiss 3T3 line cell membrane against pertussis toxin ADP-1 protein about 41kDa protein is present in the cell membrane, inside the cell membrane against ET-1 PLC activity against pertussis toxin inhibition. ET-1 has a sensitivity to A10 cells, Swiss 3T3 cells, ROS17/2 cells, ETA, or ETB receptors for acid release, and this response has a sensitivity to PLA2 inhibitors. Swiss 3T3 cells are dependent on ET-1 and PLA2 activation, and on intracellular Ca^<2+> mobilization in phase 1 (about 1 minute). The first phase, the second phase (after 2 minutes), is dependent on Ca^<2+> inflow through the cell membrane. ETA receptor production in A10 cells and Swiss 3T3 cells was different, ETB receptor production in ROS17/2 cells was 60 - 70% PLA2 activity and pertussis toxin inhibition. ET-1 promotes Ca^<2+> influx into the membrane of ROS17/2 cells mediated by ETA receptor development in A10 cells, Swiss 3T3 cells,Y-1 cells and ETB cells. A10, Swiss 3T3, ROS17/2 cells are resistant to ET-1 and Ca^<2+> influx. L-type potential-dependent Ca^<2+>-dependent growth occurs in Y-1 cells. K^+ stimulated Ca^<2+> influx into BAYK8644 cells, inhibited Ca^<2+> influx into ET-1 cells, and inhibited Ca^<2+> influx into Swiss 3T3 cells.