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紫外線損傷塩基を識別する抗体分子を用いたDNA修復機構の研究

使用识别紫外线损伤碱基的抗体分子研究 DNA 修复机制

基本信息

批准号：
09269201
负责人：
森岡弘志
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1)シクロブタン型チミンダイマーまたは(6-4)光産物を特異的に認識する1本鎖抗体(TDM2scFv抗体または64M5scFv抗体)を大腸菌システムにより大量調製し,バイオセンサー(BICcore)を用いて,損傷塩基を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析した.両scFv抗体とも,特異的な結合が観察され、結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.TDM2scFvおよび64M5scFv抗体の抗原アナログd8merに対するKd値は,それぞれ7.9±0.1×10^<-11>,1.0±0.1×10^<-10>となった.また,抗原アナログの鎖長を変化させて得られたkassおよびkdiss値から,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.また,塩濃度変化の実験から,TDM2scFv抗体の抗原結合には静電相互作用が重要であり,疎水的相互作用が結合を安定化しているという結果が示唆された.このような解析,評価法は抗体分子の改変を進めていく上で有効であることが確認された.(2)TDM2scFv抗体のHCDR3へのランダム変異導入により,天然型TDM2scFv抗体と同程度の抗原結合活性を持つクローンがいくつか得られ,その中にわずかながら天然型scFvより強い活性を持つものがあった.(3)TDM2scFv抗体および64M5scFv抗体にSV40のVP2のNLSを含む42アミノ酸領域を融合させ,真核細胞の核への導入が可能なscFv抗体分子の作製を行っている.VP2のNLS領域の遺伝子合成は完了しており,現在,scFv抗体遺伝子発現ベクターの構築を行っている.

The following is a summary of the achievements made this year. (1)The interaction between TDM2 scFv and 64M5 scFv in E. coli was studied by rate-theoretic analysis. The results showed that the interaction between TDM2 scFv and 64M5 scFv was more stable than that between TDM2 scFv and 64M5 scFv. For scFv antibody, specific binding detection, binding rate constant kass, dissociation rate constant kdiss, and dissociation constant Kd are obtained. TDM2 scFv and 64M5scFv antibody antigen binding rate constant Kd are 7.9±0.1×10^<-11>, 1.0 ±0.1 × 10^, respectively<-10>. The antigen-binding properties of scFv Fab antibodies are different. As a result, electrostatic interaction is important for antigen binding of TDM2 scFv antibody, and the interaction of water is stable. This analysis and evaluation method confirms that the modification of antibody molecules is effective. (2) The HCDR3 gene of TDM2scFv antibody was introduced into the system. The native TDM2scFv antibody had the same antigen-binding activity as the native TDM2scFv antibody. (3) TDM2 scFv antibody and 64M5 scFv antibody SV40 and VP2 NLS contain 42 amino acid domain fusion, eukaryotic nuclear introduction is possible, scFv antibody molecule reverse operation. VP2 NLS domain gene synthesis is complete, now,scFv antibody gene development process is in progress.