ヒト増殖細胞核抗原(PCNA)変換体を用いるDNA修復機構の解析

使用人增殖细胞核抗原 (PCNA) 转化体分析 DNA 修复机制

• 批准号: 08772077
• 负责人: 森岡 弘志
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772077/
• 关键词: 増殖細胞核抗原; PCNA; DNA修復; 無細胞ヌクレオチド修復系

本研究の代表者は,PCNAが関与するDNA修復の分子機構の解明を目的として,無細胞ヌクレオチド除去修復系によるin vitroでのDNA損傷修復反応を各種ヒトPCNA変換体を用いて行うことにより,(1)PCNAがDNA損傷の除去修復因子と相互作用する部位の解析,ならびに(2)PCNAと相互作用するDNA修復因子を探索するための実験系の構築を試みた.以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.1.Richard D.Woodらにより報告されている方法に従って,HeLa3S細胞の核抽出液をphosphocelluloseカラムクロマトグラフィー,続いてDEAE-Biogelカラムクロマトグラフィーにより分画し,細胞由来のPCNAおよび1本鎖DNA結合蛋白質(HSSB)を含まないフラクション(CFII)とHSSBのみを含むフラクション(CFIA)を調製した.2.紫外線照射により損傷を受けたプラスミドDNAを鋳型として,上記CFIIおよびCFIAフラクションに,既に大腸菌のシステムにより発現,精製された組換え型PCNAを加えて,in vitroでのDNA損傷の修復反応を行った.3.シクロブタン型チミンダイマーあるいは(6-4)光産物を含む合成オリゴヌクレオチドと適当な配列および鎖長のオリゴヌクレオチドをT4DNAリガーゼを用いて結合させ,紫外線損傷塩基をその中央部に1ケ所だけ有する67b.p.の2本鎖DNAフラグメントを作製した.現在,2.の実験において,損傷DNA修復活性の向上を目指して,条件検討を繰り返し行っている.

The representative of this research, the purpose of elucidating the molecular mechanism of PCNA and the molecular mechanism of DNA repair, and the cell-free repair system removal system. In vitro DNA damage repair reaction and various PCNA replacements are used, (1) PCNA DNA damage removal repair factor and interaction site analysis, noびに(2) PCNA and interaction of DNA repair factors をExploration of するための実験system のconstruction をtest みた. The following に, this year's られた新たな知见 and other results をshow す.1. Richard D.Wood's report on the method of nuclear extraction of HeLa3S cells and the use of phosphocellulose and phosphocelluloseー,続いてDEAE-Biogelカラムクロマトグラフィーにより分画し,PCNAおよび1 originally locked DNA binding protein (HSSB)をcontainsまないフラクション(CFII)とHSSBのみを合むフラクション( CFIA) Modulation. 2. Damage caused by ultraviolet irradiation and damage caused by ultraviolet radiation D NAを鋳式として, above mentioned CFIIおよびCFIAフラクションに, both big Enterobacteriaceae のシステムにより発 appear, purified された-modified type PCNA を plus えて, in DNA damage repair and reaction in vitro.3.シクロブタンチミンダイマーあるいは (6-4) Hikaru Material containing synthetic オリゴヌクレオチドと appropriate arrangement および lock length のオリゴヌクレオチドをT4DNA リガーゼを use いて Combined させ, UV damage を そ の central part に 1 ケ だ け す る 67b.p. の 2 本 lock DNA フラグメントをSystem した. Now, 2. の実験において, Damage DNA repair activity のUPを Eyes refers して, Condition 検を缲り return し行っている.

项目成果

Morioka,H.: "Structure and function of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)." Seikagaku. 68・9. 1542-1548 (1996)

Morioka, H.：“增殖细胞核抗原（PCNA）的结构和功能。” Seikagaku 1542-1548（1996）。

Todo,T.: "Flavin adenine dinucleotide as a choromophore of the Xenopus (6-4) photolyase." Nucleic Acids Res.25・4. 764-768 (1997)

Todo, T.：“黄素腺嘌呤二核苷酸作为非洲爪蟾 (6-4) 光裂合酶的脉络团。”核酸研究 25・4 (1997)。