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紫外線損傷DNAを特異的に認識する抗体分子の機能の改変

修改特异性识别紫外线损伤 DNA 的抗体分子的功能

基本信息

批准号：
10165201
负责人：
森岡弘志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1) Dewar型異性体を特異的に認識するDEM-1抗体の可変領域部遺伝子のクローニングを行い,その塩基配列およびアミノ酸配列を決定した.重鎮(H鎖)中にシステイン残基の存在が確認された.(2) Dewar型異性体特異的1本鎖抗体(DEM1scFv抗体)遺伝子の構築(VH-linker-VL型およびVL-linker-VH型)および大腸菌システムによる大量調製を行った.天然型では活性を有するscFv抗体蛋白質を得ることはできなかったが,システインをセリンに置換した変異scFv抗体では活性を有していた.(3)バイオセンサー(BIAcore)を用いて,Dewar型異性体を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析したところ,特異的な結合が観察され,結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.DEM1scFv(C47S)抗体の抗原アナログd4merに対するKd値は,2.5±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.2±0.3x10^<-7>(VL-linker-VH型),抗原アナログd6merに対するKd値は,2,4±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.7±0.5x10^<-7>(VL-linker-VH型)となった.DEM-1 Fabの抗原アナログd4merに対するKd値は,1.1±0.1x10^<-7>,抗原アナログd6merに対するKd値は,1.0±0.1x10^<-7>となった.以上のことから,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.

The following is a summary of the achievements made this year. (1)Dewar-type heteromorphic recognition of DEM-1 antibody can be divided into two parts: the first part of the gene, the second part of the gene, the third part of the gene, the fourth part of the gene, the fourth part of the gene. The presence of a site-specific residue in a key (H lock) molecule was confirmed. (2)Construction of a DEM1 scFv gene (VH-linker-VL type and VL-linker-VH type) and a large number of E. coli strains. The native scFv antibody protein is active. (3)(BIAcore) is used in the synthesis of Dewar-type heterosexuals. The interaction between them is velocity-theoretical. The specific binding is observed. The binding velocity is determined by kass. Dissociation velocity constant kdiss and dissociation constant Kd. DEM1scFv (C47S) Antibody Antigen D4 mer Kd Value = 2.5 ± 0.2x10 ^(VH-linker-VL type), 2.2 ± 0.3x10 ^(VL-linker-VH type), antigen Kd = 2,4 ± 0.2x10 ^(VH-linker-VL type), 2.7 ± 0.5x10 ^(VL-linker-VH type) Kd value for antigen of DEM-1 Fab, 1.1 ± 0.1x10 ^, Kd value for antigen of DEM-1 Fab, 1.0 ± 0.1x10 ^<-7><-7><-7><-7><-7><-7>The scFv antibody has the same antigen binding properties as Fab antibody.