分子シャペロンによるG1サイクリン依存キナーゼ(cdK4)の機能制御

分子伴侣对 G1 细胞周期蛋白依赖性激酶 (cdK4) 的功能调节

• 批准号: 09276217
• 负责人: 加藤 順也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09276217/
• 关键词: サイクリン; サイクリン依存キナーゼ; 細胞周期; Hsp40; CDC37; G1期制御

サイクリンDとサイクリン依存性キナーゼ(CDK)-4からなるタンパクキナーゼ複合体は、高等動物細胞のG1期制御に中心的役割を果たす。われわれは、CDK4と特異的に会合する分子として、K4-1(新規DnaJ様蛋白質)とCDC37を単離した。K4-1はHsp40/DnaJファミリーに属する新規蛋白質としてHsp70ファミリーと協調して作用すると推定され、CDC37はHsp90と会合して働く分子シャペロンであることが判明している。CDK4の細胞内機能に、Hsp90/CD37複合体とDnaJ様K4-1蛋白質が、分子シャペロンとして果たす役割を解明するために、HAtagを付加したそれぞれの蛋白質を発現できるベクターや、大腸菌にて組み替え蛋白質を発現、精製し、in vitro、in vivoにて実験を行った。その結果、K4-1とCDC37はin vitroにおいてCDK4と特異的に会合し、他のCDK(CDC2、CDK2、CDK6)との結合は認められなかった。K4-1に比べ、CDC37の方がCDK4とより強い(安定な)結合を示した。K4-1あるいはCDC37とCDK4との結合は、COS細胞中でも認められた。この場合もCDC37の方がK4-1と比べてより強い結合を示した。K4-1とCDC37は、ともに細胞質に局在していることから、両分子シャペロンとCDK4との相互作用の場が核外であると予想された。組み替え蛋白質を用いた試験管内再構成系を用いた実験から、K4-1がサイクリンD/CDK4複合体を活性化しうることが判明した。この条件下ではCDC37は、ほとんど効果はなかった。ウサギを用いて、それぞれの分子に対する特異的抗体を作製した。現在、K4-1とCDC37の細胞内における挙動、機能についてより詳細に検討中である。

/ The rendezvous molecules of CDK4 genes, K4-1 (new DnaJ proteins), CDC37 proteins isolated from each other. K4-1 "Hsp40/DnaJ", "Hsp70", "Hsp70", "coordination", "presumption", "CDC37", "rendezvous", "molecular", "molecular", "protein", "molecular", "molecule", "protein", "molecule", "protein", "protein". CDK4 cytoskeleton, Hsp90/CD37 complex, DnaJ K4-1 protein, molecular DNA, HAtag, in vitro, in vivo, protein, protein, protein and protein. The results of the test, the rendezvous of the K4-1 CDC37 in vitro characteristic, the other CDK (CDC2, CDK2, CDK6), the combination of the two, and the rendezvous of the other CDK (CDC2, CDK2, CDK6). The combination of K4-1, CDC37, CDK4, and diazepam shows the difference between the two groups. The combination of K4-1, CDC37, CDK4, and the cell of COS. The combination of CDC37 and K4-1 is stronger than that of the other. K4-1 "CDC37", "cell", "cell", "molecular", "CDK4", "interaction", "extranuclear", "envisioned". The tissue substitute protein was reconstructed in the tube and was identified by the activation of the D/CDK4 complex, K4-1 and K4-1. If you want to CDC37, please do not know if you want to do so. Use antibodies that are specific to the molecules that are specific to each other. At present, the K4-1 CDC37 cell is involved in the movement of intracellular fuel cell, and the machine is in the middle of the cycle.