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小型ツメガエルを用いた、MBT特異的発現遺伝子の網羅的解析

小非洲爪蟾 MBT 特异性表达基因的综合分析

基本信息

批准号：
14011230
负责人：
加藤順也
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

両生類の初期発生過程におけるMidblastula移行(MBT)では、Zygoticな転写と細胞分化の開始、G1間期の出現と体細胞型への細胞周期の変換と大きな変化が起こるが、その分子機構の解明は大きな命題の一つである。我々はG1/S転移期に重要な働きをする転写因子E2Fに着目し、MBTでの機能解析を行っており、MBT以後にE2F活性が上昇することがMBT以後の発生過程に重要な役割を果たしていることを明らかにしてきた。MBT前後におけるE2Fの標的遺伝子候補を網羅的に解析するために、MBT後に転写量が増加する遺伝子の断片を数多く単離した。ディファレンシャルスクリーニングにより得られた150クローンに加えて、ディファレンシャルディスプレイ法によりさらに多くの候補遺伝子断片を得、すべて塩基配列を決定した。これらについてMBT前後での転写量の変化をノーザンブロッティング法により解析し、MBT以後に特異的に上昇する候補クローンをいくつか得ることができた。データベースでの検索ではほとんどのクローンのESTはまだ得られていないので全長のcDNAを単離し解析する予定である。また、サイクリンD1プロモーターに続いてXic1プロモーターを単離し、プラスミドインジェクション法によりカエル個体内でプロモーターアッセイを行った。その結果、Xic1プロモーターの機能部位を生体内で決定した。

Midblastula transition (MBT) is the process of early development of human beings, Zygotic development, initiation of cell differentiation, appearance of G1 interphase, initiation of somatic cell cycle transition, and elucidation of molecular mechanisms. I write the factor E2F in the G1/S transition period, and the function analysis of MBT shows that the activity of E2F increases after MBT. The number of fragments of the target gene before and after MBT increased. The number of candidate fragments is determined by the number of candidate fragments obtained and the number of base pairs determined. The change in the amount of writing before and after MBT is based on the analysis of the method, and the rise in the specific candidate after MBT. The full length cDNA of the cDNA was analyzed separately. In addition, Xic1 can also be used as an in vivo tool to detect the presence of a virus. Xic1 is the functional part of the organism.