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小型ツメガエルを用いた、MBT特異的発現遺伝子の網羅的解析

小非洲爪蟾 MBT 特异性表达基因的综合分析

基本信息

批准号：
12202031
负责人：
加藤順也
金额：
--
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

両生類の初期発生過程におけるMidblastula移行(MBT)では、Zygoticな転写と細胞分化の開始、G1間期の出現と体細胞型への細胞周期の変換と大きな変化が起こるが、その分子機構の解明は大きな命題の一つである。我々はG1/S転移期に重要な働きをする転写因子E2Fに着目し、MBTでの機能解析を行った。レポーター遺伝子を用いて測定したところ、MBTを境に内在性E2F活はが上昇した。優性不能型E2Fタンパク質を導入するとMBT後の内在性E2F活性の上昇が阻害され、MBT以後の発生過程に異常が認められた。優性不能型E2Fタンパク質の導入によりMBT前では変化は認められなかったが、野性型E2Fタンパク質を導入した胚ではMBT以前にE2F活性が上昇し卵割に異常を生じた。これらのことから、MBT以後にE2F活性が上昇することがMBTの正常な転移に重要な役割を果たしていることがわかる。MBT前後におけるE2Fの標的遺伝子候補を網羅的に解析するために、MBT前後の胚から抽出したmRNAを用いてディファレンシャルスクリーニングを行い、MBT以後に発現が上昇する遺伝子の候補を150クローン得た。現在、これらの遺伝子のさらなる解析を進めるとともに、優性不能型E2Fにて抑制され、野性型E2Fによって活性化されるクローンの選別を行っている。また、サイクリンD1プロモーターにレポーターとしてGFPを連結後、これを用いてトランスジェニック個体を作成し、in vivoでのプロモーターアッセイ系を確立した。さらに、段階的欠失変異体を用いて同様に解析しサイクリンD1プロモーターの活性化に必要な領域を定めた。

Midblastula transition (MBT) is the process of early development of human beings, Zygotic development, initiation of cell differentiation, appearance of G1 interphase, initiation of somatic cell cycle transition, and elucidation of molecular mechanisms. We have a G1/S transition factor, E2F, and a functional analysis of MBT. E2F activity in the environment is increasing. The intrinsic E2F activity after MBT was inhibited by the introduction of the dominant E2F protein, and the abnormal development after MBT was recognized. E2F activity increased before introduction of MBT. E2F activity increased after introduction of MBT. E2F activity increased after MBT, and MBT activity increased after MBT. E2F target gene candidates before and after MBT were analyzed, mRNA was extracted before and after MBT, and 150 target gene candidates were found after MBT. Now, the analysis of these genes is progressing, and the selection of E2F is performed according to the inhibition and activation of E2F. After GFP is linked, the system is established in vivo. In addition, the missing parts of the stage are used to analyze the necessary fields for activation.