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リボソームGTPaseセンターにおけるrRNAとタンパク質の機能的相互作用

核糖体 GTP 酶中心 rRNA 和蛋白质的功能相互作用

基本信息

批准号：
09278212
负责人：
内海利男
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

蛋白質合成過程で必要となるGTP水解反応にrRNA中の"GTPaseドメイン"と"毒素ドメイン"と呼ばれる二つの部位が関わることが示されているが、両部位のリボソーム粒子中の位置関係は知られていない。本研究は、両RNAドメインに結合するリボソーム蛋白質の解析から二つのRNA部位の相互関係を明確にすることを目的として進められ、以下のような成果が得られた。1)毒素ドメインに結合する大腸菌リボソームタンパク質の同定毒素ドメインを構成する135ヌクレオチドより成るRNA断片をプローブとして、結合するリボソーム蛋白質をゲルシフト法により検索した。その結果、L6蛋白質がこの短いRNA断片に特異的に結合することが判明した。またFootprint法による解析の結果、毒素ドメインの中で、ペプチド鎖伸長因子や毒素の標的部位になる"毒素ループ"部位とL6/L3との相互作用が示され、これらが毒素ドメインの高次構造形成に寄与することが示唆された。2)GTPaseドメインに結合する大腸菌リボソーム蛋白質 GTPaseドメインにL7/L12/L10蛋白質複合体およびL11の結合を示すFootprint法等による解析結果が報告されているが、我々はGTPaseドメインの100ヌクレオチドより成るRNA断片を用いた独自のゲルシフト法によりこれらの結合を確証した。3)リボソーム粒子中の毒素ドメインとGTPaseドメインとの位置的関係リボソーム粒子中の各蛋白質の位置関係は化学的架橋実験や免疫電子顕微鏡により解析された多くの情報から推察することができる。本研究で同定された毒素ドメインに結合するL6蛋白質はGTPaseドメインに結合するL7/L12,L10,L11の各蛋白質と隣接関係にある。したがって。両RNAドメインはリボソーム中で互いに近傍に位置し、蛋白質を介して協調的に働くと推察された。

Protein synthesis process is necessary, GTP hydrolysis reaction in rRNA "GTase""toxin""and call the two parts of the relationship between the two parts of the particle is known. The purpose of this study is to clarify the relationship between RNA and protein binding, and to achieve the following results. 1)Toxin binding to E. coli and protein binding to E. coli. As a result, specific binding of L6 protein to these short RNA fragments was identified. The results of analysis by Footprint method showed that the interaction between the toxin site and L6/L3 in the middle, middle and target sites of toxin, and the formation of higher-order structures of toxin site. 2) GTase protein binding to Escherichia coli protein GTase protein binding to L7/L12/L10 protein complex and L11 binding to GTase protein binding to L7/L12/L10 protein complex and L11 binding to GTase protein binding to L7/L12/L10 protein complex and L11 protein binding to GTase protein binding to L7/L12/L10 protein complex and L11 protein binding to L7/L12/L10 protein complex and L11 protein binding to L7/L12/L10 protein complex. 3) The positional relationship between toxin and GTase in the particle was analyzed by chemical bridging and immunoelectron microscopy. In this study, we determined the protein binding relationship between L6 and L7/L12,L10 and L11.したがって。The RNA gene is located in the middle of the genome, and the protein gene is located in the middle of the genome.