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リボソームRNAの機能ドメインとそのタンパク質認識・高次構造

核糖体RNA的功能域及其蛋白质识别/高阶结构

基本信息

批准号：
07250209
负责人：
内海利男
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

I.動物Pタンパク質複合体のGTPase RNAドメインへの結合ラット肝リボソームより精製したリボソームPタンパク質,P0,P1,P2はin vitroで複合体を形成し、28S rRNAのGTPaseドメインに強い結合性を示した。また、Footfrint法による解析によって、その結合部位と考えられる一つのinternal loopをドメイン中に同定した。Pタンパク質複合体はラットGTPase RNAドメインばかりでなく、大腸菌の相同ドメインにも強く結合した。この結合によって、真核生物型GTPase RNAドメインの高次構造を認識する抗28S抗体の結合性が増強することが判明し、Pタンパク質の結合がRNAの機能構造形成に影響を与えることが示唆された。同様な手法で、大腸菌の相同体L8複合体もドメイン構造に影響を与えることが示された。II.動物Pタンパク質複合体の大腸菌リボソームへの結合とその効果大腸菌リボソームからL7/L12タンパク質(またはL7/L12/L10)を特異的に除いたコア粒子とP0/P1/P2複合体を混合させることにより、Pタンパク質複合体と大腸菌リボソームとから成るハイブリッド(70S-P粒子)が得られた。Pタンパク質の役割を明確にするため、大腸菌intact 70Sリボソームとは作用しない動物細胞の伸長因子EF-2に対する70S-P粒子の受容性を解析した。70S-P粒子はもはや大腸菌の伸長因子EF-G依存のGTPase活性を保持せず、かわりに高い動物EF-2依存のGTPase活性を示した。また、70S-P粒子は動物細胞のEF-1α/EF-2因子依存のポリフェニルアラニン合成活性も示した。これらの活性はGTPase RNAドメインのリガンドである抗生物質チオストレプトンによって阻害された。さらに、GTPaseドメインのRNA断片をCompetitorとして加え、70S-P粒子形成を妨げた場合も活性が抑制された。以上の結果より、酸性タンパク質複合体がGTPase RNAドメインの一定部位に結合し、RNA構造調整と機能発現に関わることが示された。

I. GTase RNA binding activity of animal P-protein complex,P0,P1,P2 in vitro complex formation, strong binding activity of 28S rRNA in GTase RNA complex The Footfrint method is used to analyze the internal loop of the compound. The protein complex is strongly bound to the same protein as E. coli. The binding ability of anti-28S antibody was enhanced by the recognition of the higher-order structure of eukaryotic GTase RNA. The same method, the same body of Escherichia coli L8 complex, the structure of the structure of the influence of the same method and the same method. II. The Escherichia coli free protein complex of animal P species was isolated from the L7/L12 free protein (L7/L12/L10) by specific methods. Analysis of the receptivity of 70S-P particles in E. coli 70S-P particles are not only resistant to E. coli elongation factor EF-G dependent GTase activity, but also resistant to high E. coli EF-2 dependent GTase activity. In addition, 70S-P particles have demonstrated EF-1α/EF-2 factor-dependent Polifenisol ARANIN synthesis activity in animal cells. The activity of GTase RNA is inhibited by the presence of anti-biotic agents. In addition, GTase activity is inhibited when RNA fragments are added and 70S-P particles are formed. These results indicate that the acidic protein complexes bind to certain sites of GTase RNA, RNA structure regulation and function development.