哺乳動物個体に導入された外来遺伝子の安定性の検討

检查引入哺乳动物个体的外源基因的稳定性

• 批准号: 01619002
• 负责人: 井上 正
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01619002/
• 关键词: トランスジェニックマウス; 外来遺伝子; ラムダファージ

トランスジェニックマウスとラムダファージ試験管内パッケージ法を用いて,哺乳動物生殖細胞/個体レベルで外来遺伝子の安定性を検討しうる系の開発を目指し,以下の実験を行った.遺伝子マーカーとして選択した大腸菌supF遺伝子はトランスファーRNAの構造遺伝子でありamber変異をサプレスするが、この遺伝子をプラスミドpBR322に組込みさらにこれを、試験管内でパッケージすることが出来るラムダファージEMBL3に導入し多くの組換え体を得、これらの制限酵素地図を作成するとともに、試験管内パッケージの効率の高いものを選択した。組換えファージのsupF遺伝子に生じた突然変異は、適当な大腸菌指示菌(lacZam)を用いてプラークの色の変化として、容易に検出でき、さらに、挿入されている、pBR322を切り出すことにより、変異部分の塩基配列も簡単に決定できる。実際、このファージを、紫外線照射した大腸菌内で増殖させると、線量に依存して突然変異頻度が増加し、突然変異株の塩基配列を決定できた。上記組換えファージDNAをマウス授精卵に導入し、ラムダに含まれるsupFをトランスジーンとして保有するマウス系統をサザン法により選択し、現在までに2系統のトランスジェニックマウス系統を得た。それらのDNAを試験管内パッケージすることにより、マウス細胞で生じたsupFの変化を大腸菌を用いて検出/定量することをこころみ、パッケージの効率や、塩基置換の頻度などに関して、解析を行っている。

ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス と ラ ム ダ フ ァ ー ジ test tube パ ッ ケ ー を ジ method with い て, mammalian germ cell/individual レ ベ ル で foreign heritage 伝 の stability を son beg し 検 う る started の 発 を refers し, the following の be 験 を line っ た. Posthumous son 伝 マ ー カ ー と し て sentaku し た coliform supF heritage 伝 son は ト ラ ン ス フ ァ ー RNA の tectonic heritage 伝 son で あ り amber - different を サ プ レ ス す る が, こ の heritage 伝 son を プ ラ ス ミ ド pBR322 に group 込 み さ ら に こ れ を, test tube で パ ッ ケ ー ジ す る こ と が out る ラ ム ダ フ ァ ー ジ EMBL3 に guide The し multiple く の group in え を too, こ れ ら limitations の enzymes to 図 を made す る と と も に, test tube パ ッ ケ ー ジ の sharper rate high の い も の を sentaku し た. Group in え フ ァ ー ジ の supF heritage 伝 child born に じ た suddenly - different は, appropriate な coliform indicator bacteria (lacZam) を い て プ ラ ー ク の の color variations change と し て, easy に 検 out で き, さ ら に, scions into さ れ て い る, pBR322 を り cutting out す こ と に よ り, - different parts の salt base with column も Jane 単 に decided で き る. Be international, こ の フ ァ ー ジ を, ultraviolet irradiation し た coliform で raised in colonization さ せ る と, line に dependent し て suddenly - different frequency が raised し, suddenly - different strains の salt base with column を decided で き た. Written group in え フ ァ ー ジ DNA を マ ウ ス insemination eggs に import し, ラ ム ダ に containing ま れ る supF を ト ラ ン ス ジ ー ン と し て retain す る マ ウ ス system を サ ザ ン method に よ り sentaku し, now ま で に 2 system の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ た を ス system. そ れ ら の を DNA test tube パ ッ ケ ー ジ す る こ と に よ り, マ ウ ス cells born で じ た supF の variations change を coliform を with い て 検 out/quantitative す る こ と を こ こ ろ み, パ ッ ケ ー ジ の sharper rate や, salt replacement の frequency な ど に masato し analytical line を っ て, て い る.

项目成果

Kuroda,Y.& Inoue,T.: "Antimutagenesis by factors affecting DNA repair in bacteria" Mutation Res.202. 387-391 (1989)

黑田，Y.