检查引入哺乳动物个体的外源基因的稳定性-猫眼课题宝

检查引入哺乳动物个体的外源基因的稳定性

批准号：

02206204

负责人：

井上正

金额：

$1.28万

依托单位：

Nihon University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

财政年份：

1990

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1990 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02206204/

关键词：

トランスジェニックマウス外来遺伝子ラムダファ-ジ

项目摘要

项目成果

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トランスジェニックマウスとラムダファ-ジ試験管内パッケ-ジ法を用いて、哺乳動物生殖細胞/個体レベルで外来遺伝子の安定性を検討しうる系の開発を目指し、以下の実験を行なった。遺伝子マ-カ-として選択した大腸菌supF遺伝子をプラスミドpBR322に組込みさらにこれを、試験管内でパッケ-ジすることが出来るラムダファ-ジEMBL3を導入し多くの組換え体を得、これらの制限酵素地図を作成するとともに、試験管内パッケ-ジの効率の高いものを選択した。組換えファ-ジのsupF遺伝子に生じた突然変異は、適当な大腸菌指示菌を用いてプラ-クの色の変化として、容易に検出でき、さらに、挿入されている、pBR322を切り出すことにより、変異部分の塩基配列も簡単に決定できる。この組換えファ-ジDNAを887個のマウス授精卵に導入し、ラムダに含まれるsupFをトランスジ-ンとして保有する57のマウス系統をサザン法により選択した。これらのトランスジェニックマウスには、1細胞あたり1コピ-から50コピ-以上のトランスジ-ンを有するものまでが存在した。それらのDNAを試験管内パッケ-ジすることにより、マウス細胞で生じたsupF変化を大腸菌を用いて検出/定量したところ、この検出系における自然突然変異率は約0.07x10ー5と推定された。また、得られた突然突異の塩基配列を解析した結果、これらの変異は1塩基置換により生じていることが示され、この検出系の有効性が確認されたが、試験管内パッケ-ジングの効率が、理論的に予想される値よりもきわめて低し、この点の改善が必要であることも明らかになった。

期刊论文(2)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Iwabuchi,M.: "Purification and some properties of a siteーspecific endoーdeoxyribonuclease from a yeast,Pichia membranaefaciens" Biosci.Biotech.Biochem.

Iwabuchi, M.：“来自酵母膜毕赤酵母的位点特异性内切脱氧核糖核酸酶的纯化和一些特性”Biosci.Biotech.Biochem。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

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