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哺乳動物個体に導入された外来遺伝子の安定性の検討

检查引入哺乳动物个体的外源基因的稳定性

基本信息

批准号：
02206204
负责人：
井上正
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02206204/
关键词：
トランスジェニックマウス外来遺伝子ラムダファ-ジ

项目摘要

トランスジェニックマウスとラムダファ-ジ試験管内パッケ-ジ法を用いて、哺乳動物生殖細胞/個体レベルで外来遺伝子の安定性を検討しうる系の開発を目指し、以下の実験を行なった。遺伝子マ-カ-として選択した大腸菌supF遺伝子をプラスミドpBR322に組込みさらにこれを、試験管内でパッケ-ジすることが出来るラムダファ-ジEMBL3を導入し多くの組換え体を得、これらの制限酵素地図を作成するとともに、試験管内パッケ-ジの効率の高いものを選択した。組換えファ-ジのsupF遺伝子に生じた突然変異は、適当な大腸菌指示菌を用いてプラ-クの色の変化として、容易に検出でき、さらに、挿入されている、pBR322を切り出すことにより、変異部分の塩基配列も簡単に決定できる。この組換えファ-ジDNAを887個のマウス授精卵に導入し、ラムダに含まれるsupFをトランスジ-ンとして保有する57のマウス系統をサザン法により選択した。これらのトランスジェニックマウスには、1細胞あたり1コピ-から50コピ-以上のトランスジ-ンを有するものまでが存在した。それらのDNAを試験管内パッケ-ジすることにより、マウス細胞で生じたsupF変化を大腸菌を用いて検出/定量したところ、この検出系における自然突然変異率は約0.07x10ー5と推定された。また、得られた突然突異の塩基配列を解析した結果、これらの変異は1塩基置換により生じていることが示され、この検出系の有効性が確認されたが、試験管内パッケ-ジングの効率が、理論的に予想される値よりもきわめて低し、この点の改善が必要であることも明らかになった。

The development of a system for the study of the stability of exotic genes in mammalian germ cells/individuals using the in-tube hybridization method is described below. E. coli supF gene expression system pBR322 is used to select the enzyme expression system in the test tube. The enzyme expression system pBR322 is used to select the enzyme expression system. The change of color and color of the indicator bacteria, the easy detection of the change of color and color, the change of pBR322, the change of color and color of the indicator bacteria, the change of color 887 of these DNA fragments were introduced into the system, and 57 of them were retained. This is the first time a cell has ever been found in a cell. The natural mutation rate of E. coli in the DNA test tube is about 0.07x10 ~ 5. The results of the analysis of the sudden change in the base arrangement show that the existence of the system is confirmed by the theoretical analysis of the value of the change in the base arrangement.