クロマチンの凝縮とヒストンH1,H3のリン酸化

染色质缩合和组蛋白 H1、H3 磷酸化

• 批准号: 02260216
• 负责人: 網代 廣三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260216/
• 关键词: 染色体; ヒストン; リン酸化

細胞周期においてcdc2/ヒストンH1キナ-ゼがG2/M期で活性化された後、染色体形成に至る過程はまだ不明である。本研究の目的は染色体の凝縮,脱凝縮および核形成の分子機構を明らかにするために,1)染色体の主要な構成蛋白であるヒストンH1の高度なリン酸化およびM期特異的H3のリン酸化の役割を明らかにすること、2)染色体の脱凝縮に欠陥がある温度感受性変異株細胞,tsTM13のヒストンのリン酸化を調べ、tsTM13細胞の異常要因を明らかにすることである。本年度は次のような点が明らかとなった。1)TsTM13細胞では非許容温度(39°C)下で染色体が凝縮状態にある時、H1キナ-ゼ活性は許容温度の場合と比べ,数倍以上高く、H1,H3は著しくリン酸化されていた。H3のリン酸化サイトはM期の場合と同一(Ser10)であり、細胞抽出液内のSer/Thrー脱リン酸化酵素活性には異常はなかった。プロテインキナ-ゼの阻害剤であるスタウロスポリンやTyrー脱リン酸化酵素の阻害剤であるバナジン酸を処理すると、染色体脱凝縮,核形成が促進され、H1,H3が脱リン酸化された。これに対しSer/Thrー脱リン酸化酵素の阻害剤であるオカダ酸を処理すると、クロマチン凝縮が誘導され、H3のセリン10が強くリン酸化された。何れの場合もH3のリン酸化/脱リン酸化とクロマチンの凝縮/脱凝縮とが特異的に対応していた。これらの結果、tsTM13の異常はH1キナ-ゼの活性調節機構にあると考えられた。2)すでに精製されているリン酸化酵素を用いて調べたところ、Aキナ-ゼおよびCa^<2+>/カルモデュリンキナ-ゼII(CaMPK2)がH3をリン酸化させることが分かった。ヒラ細胞の核抽出液からH3キナ-ゼの活性分画を分離した。無細胞系でH3ヲリン酸化させた結果、cdc2キナ-ゼおよびAキナ-ゼ特異的阻害ペプチドでは影響が少なく、CaMPK2阻害剤(Wー7)で最も強く阻害された。

The cell cycle from cdc2/cdc2/cdc2 to H1/cdc2/cdc2 to H1/cdc2/cdcdc2/cdcdc The purpose of this study is to clarify the molecular mechanism of chromosome condensation, decondensation and nuclear formation, 1) the high degree of chromosome acidification of the main component proteins of chromosomes, 2) the temperature sensitive variant cells of chromosome condensation, 3) the regulation of chromosome acidification of tsTM13 The abnormality of tsTM13 cells is mainly caused by the following factors: This year, the number of people who have died is increasing. 1) TsTM13 cells are in the condensed state at the non-allowable temperature (39°C), H1-H3 activity is several times higher than that at the allowable temperature. The activity of Ser/Thr deacidifying enzyme in cell extract is abnormal. The enzyme inhibitor of the enzyme Tyr-deacidification, chromosome decondensation, nuclear formation promotion, H1,H3 deacidification. The inhibitor of Ser/Thr deacidifying enzyme was used to induce the condensation of H3 and H4. In some cases, H3 can be acidified or deacidified, condensed or decondensed, and can be used as a special agent. The result of this study was that tsTM13 was abnormal and H1 was abnormal. 2) In the process of purification, the acid metabolites are used to regulate the activity of A, B, C, D, E, F, E, E, The nuclear extract of the cells was isolated from the active fraction of H3-H4. As A result of H3 rylin acidification in no cell line, cdc2-and A-specific inhibitory proteins have little effect, and the CaMPK2 inhibitory agent (W-7) has the strongest inhibitory effect.

项目成果

Kiyotaka shibata,Masaki Inagaki,Kozo AJIRO: "Mitosisーspecific histone H3 phosphorylation in vitro in nucleosomes." Europian Journal of Biochemistry.192. 87-93 (1990)

Kiyotaka shibata、Masaki Inagaki、Kozo AJIRO：“核小体中体外有丝分裂特异性组蛋白 H3 磷酸化。”192（1990 年）。

網代 廣三: "細胞周期におけるヒストンの可逆的リン酸化の機能" 実験医学. (1992)

Hirozo Ajiro：“细胞周期中组蛋白可逆磷酸化的功能”实验医学（1992）。

Tsuje.H,Ajiro.K,Honi.T,ほか 名: "A Temperatureーseusitrie CHOーK1 cell mutant(ts TM13)Lefective in Chromosome lecon Lensation in M phase." Exp.Cell Res.198. 201-213 (1992)

Tsuje.H、Ajiro.K、Honi.T 等人名称：“M 期染色体 Lecon Lensation 中的温度-seusitrie CHO-K1 细胞突变体（ts TM13）”。 201-213（1992）

Tokui.T,Ajuro,K Matsukage,A ほか 名: "Inactivation of DNA polymerse β by in vitro phosphorylation with protein Kinase Kinase C" J.Biol.Chem.266. 10820-10824 (1991)

Tokui.T、Ajuro、K Matsukage、A 等人名称：“通过蛋白激酶激酶 C 体外磷酸化灭活 DNA 聚合酶”J.Biol.Chem.266（1991）。

柴田 清孝,網代 廣三: "ヌクレオソ-ム形成によるヒストン リン酸化の調節" 抗酸菌研究所雑誌. 41. 284-292 (1989)

Kiyotaka Shibata，Hirozo Ajiro：“核小体形成对组蛋白磷酸化的调节”《分枝杆菌研究所杂志》41. 284-292 (1989)。