発癌物質の代謝活性化にかかわるP‐450遺伝子群の誘導的発現機構

参与致癌物代谢激活的P-450基因的诱导表达机制

• 批准号: 03258202
• 负责人: 藤井 義明
• 金额: $ 7.68万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03258202/
• 关键词: 多環性芳香族発癌物質; 代謝活性化; DNAエレメント; サウス・ウェスタン法; Sp1; BTEB; プロモ-タ-; GCbox

ベンツピレンなどの多環性芳香族発癌物質の代謝活性化に関与する、CYP1A1(P450c)遺伝子の薬物による誘導には少くとも二つのDNAエレメント(BTEとXRE)の存在が必要である。BTEに結合する因子をサウス・ウェスタン法によってクロ-ニングを行い、得られた2種のcDNAの性質を調ベた。構造解析の結果Sp1と新しいDNA総合タンパク質BTEBであることが示されている。これらのcDNAをRSVあるいはCMVのプロモ-タ-の下流に結合させて融合遺伝子を作製し、種々のGCboxを持つプロモ-タ-にCAT遺伝子を結合させたレポ-タ-遺伝子とコトランスフェクトすることによって、その活性を検討した。Sp1とBTEBはSV40やHIVなどのようにGCboxが複数個あるプロモ-タ-に対しては転写を促進することがわかった。しかしCYP1A1遺伝子のようにGCbox(BTE)が一つしかないプロモ-タ-では、Sp1は転写活性化因子として働くのに対し、BTEBはむしろ阻害的に働き、Sp1と一緒に細胞に導入するとSp1の活性化を抑制する。これは恐らくBTEBの単独の結合では転写促進能が弱く、Sp1は強いためであると考えている。細胞内で二つの因子がこのようにして働いているかは今後の問題である。BTEBの遺伝子を単離してその発現を検討した結界、BTEB遺伝子には強いプロモ-タ-活性があることがわかった。さらにBTEBmRNAは翻訳レベルでの調節も働いている可能性が示唆された。BTEBの生化学的性質を明らかにするためにT7のプロモ-タ-の下流にそのcDNAを結合させ、大腸菌での発現を試みている。現在のところ今タンパク質の1%以上の発現が見られるが、封入体に取り込まれて発現していると考えられ、不溶化しているので、これを可容化し精製することを考えている。XREに働く因子についてもcDNAクロ-ニングを行っている。

The relationship between metabolic activation of polycyclic aromatic carcinogens and CYP1A1 (P450c) inheritance It is necessary for the existence of 伝子の薬物によるinducing には小くとも二つのDNAエレメント(BTEとXRE). BTE combines the する factor をサウス・ウェスタン法によってクロ-ニングを行い, and obtains られた2 kinds of cDNA properties and をadjusted ベた. The results of structural analysis are Sp1 and new DNA conjugation materials BTEB.これらのcDNAをRSVあるいはCMVのプロモ-タ-のdegradableにcombinationさせてfusion缝子をproductionし、kind々のGCboxをholdつプロモ-タ-にCAT伝子をcombinationさせたレポ-タ-伝子とコトランスフェクトすることによって, そのACTIVE を検した. Sp1とBTEBはSV40やHIVなどのようにGCboxがplural あるプロモ-タ-に対しては転WRITE をpromote することがわかった.しかしCYP1A1 GCbox(BTE)が一つしかないプロモ-タ-では、Sp1は転WRITE ACTIVATING FACTORとして卍くのに対し, BTEB はむしろ blocked に働き, Sp1 と一 thread cell に introduction するとSp1 のactivation を inhibit する.これは fear らくBTEBの単多のcombine では転WRITE to promote the ability が weak く, Sp1 は strong いためであるとtest えている. The intracellular factor is the factor that will cause the problem in the future. BTEB's remaining 伝子を単利してその発appears を検したenchantment, BTEB's remaining 伝子には强いプロモ-タ-active があることがわかった.さらにBTEBmRNAはturned訳レベルでの Regulationも働いているpossibilityがshows instigationされた. The biochemical properties of BTEB are を明らかにするためにT7 のプロモ-タ-のdegradable にそのcDNAをbinding させ, coliform での発 appear をtest みている. Now the のところNow タンパクquality の発appears が见られるが, the sealed body にGET り込まれて発appearsしていると卡えられ, insolubilized しているので, これをcontainable しrefined することを凯えている. XRE に働くfactor についてもcDNAクロ-ニングを行っている.

项目成果

Y.Fujii‐Kuriyama: "Regulation of CYP1A1 expression." FASEB J.6. 706-710 (1992)

Y.Fujii-Kuriyama：“CYP1A1 表达的调节。”FASEB J.6（1992）。

Y.Kikuta: "A novel species of cytochrome P‐450(P‐450ib)specific for the small intestine of rabbits." J.Biol.Chem.266. 17821-17825 (1991)

Y.Kikuta：“一种针对兔子小肠的新型细胞色素 P-450(P-450ib)。”J.Biol.Chem.266 (1991)。

K.Kawajiri: "P450 and human cancer." Jpn.J.Cancer Res.82. 1325-1335 (1991)

K.Kawajiri：“P450 与人类癌症。”

N.Yokotani: "cDAN cloning and expression of the mRNA for cytochrome p‐450kd which shows a fatty acid ω‐hydroxylating activity." Eur.J.Biochem.196. 531-536 (1991)

N. Yokotani：“显示脂肪酸 ω-羟基化活性的细胞色素 p-450kd 的 mRNA 的 cDAN 克隆和表达。”Eur.J.Biochem.196 (1991)。