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抗体固定化磁性細菌粒子によるアレルゲンの認識および除去

抗体固定化磁性細菌粒子によるアレルゲンの認識および除去
抗体固定化磁性细菌颗粒识别和去除过敏原
批准号：
04205032
负责人：
松永 是
金额：
$1.02万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1990 至 1992
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04205032/
关键词：
抗体磁性細菌粒子アレルゲン発光イムノグロブリンG

项目摘要

项目成果

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本年度の研究ではアレルゲンの分離と検出のさらなる高感度化のため、IgGをサンプルとして一次抗体を固定化した磁気微粒子を用いて回収し、アルカリフォスファターゼ標識した二次抗体により検出するシステムの構築について検討を行った。磁性細菌粒子への、抗IgG抗体の固定化は、二価架橋試薬であるSPDPを用いて行った。まず、ね性細菌粒子表面を覆う有機薄膜に含まれるアミノ基とSPDPを反応させ、ピリジルジスルフィド基を導入させる。抗体はジチオスレイトールを用いて還元し、SH基を持たせた。このようにしてSH基を持たせた抗体と磁性細菌粒子との間にジスルフィド結合を形成させ、抗体固定化磁性細菌粒子を作製した。次に作製した抗体固定化ね性細菌粒子を用いて、IgGの分離及び検出について検討した。抗体固定化磁性細菌粒子をIgG溶液(0-10^2pg/ml)にまぜ、37℃、1時間反応させ磁石により磁気分離し、抗原抗体反応によって結合したIgGの回収を行った。さらに二次抗体であるアルカリフォスファターゼ(AP)によって酵素標識した抗IgG抗体を抗体固定化磁性細菌粒子に反応したIgGとまぜ、37℃、1時間反応させ磁気的分離の後、発光基質としてLumi-Phos530(Lumigen Inc製)を加えた。その後ルミネッセンスリーダーBLR-301(アロカ株式会社製)によって発光強度が安定したところで測定しIgG濃度の検出を行った。まず、二次抗体の濃度を6μg/mlの濃度で反応を行ったところ、IgG濃度と発光強度の間に相関関係が得られ、1pg/mlの濃度までIgGの濃度を検出することが可能であることが示された。
期刊论文(10)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Ryuji Kawaguchi: "Phylogeny and 16s rRNA Swquence of Magnetospirillum sp.AMB-1,an Aerobic Magnetic Bacterium." Nucleic Acids Research. 20. 1140 (1992)
Ryuji Kawaguchi：“需氧磁性细菌 Magnetospirillum sp.AMB-1 的系统发育和 16s rRNA 序列。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tadashi Matsunaga: "Magnetites in Magnetic Bacteria and their new Application." Automedica. 14. 247-256 (1992)
Tadashi Matsunaga：“磁性细菌中的磁铁矿及其新应用。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tadashi Matsunaga: "Respiratory inhibitors of a magnetic bacterium Magnetospirillum sp.AMB-1 capable of growing aerobically" Applied Microbiology and Biotechnology. (1993)
Tadashi Matsunaga：“能够有氧生长的磁性细菌 Magnetospirillum sp.AMB-1 的呼吸抑制剂”应用微生物学和生物技术。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tadashi Matsunaga: "Gene Trasfer in Magnetic Bacteria;Transposon Mutagene-sis and Cloning of Genomic DNA Fragments Required for Magnetosome Synthesis." Journal of Bacteriology. 174. 2748-2753 (1992)
Tadashi Matsunaga：“磁性细菌中的基因转移；磁小体合成所需的基因组 DNA 片段的转座子诱变和克隆。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
ヒト血球系安定細胞株を用いた化学物質リスク評価システムの開発
磁性細菌ディスプレイによる磁気トラップリガンドスクリーニングシステムの開発
ギガアッセイに向けた酵素反応用ナノスペースの構築
環境ゲノムからのバイオナノマグネタイト合成遺伝子群の探索
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