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抗体固定化磁性細菌粒子によるアレルゲンの認識および除去

抗体固定化磁性细菌颗粒识别和去除过敏原

基本信息

批准号：
04205032
负责人：
松永是
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1992
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04205032/
关键词：
抗体磁性細菌粒子アレルゲン発光イムノグロブリンG

项目摘要

本年度の研究ではアレルゲンの分離と検出のさらなる高感度化のため、IgGをサンプルとして一次抗体を固定化した磁気微粒子を用いて回収し、アルカリフォスファターゼ標識した二次抗体により検出するシステムの構築について検討を行った。磁性細菌粒子への、抗IgG抗体の固定化は、二価架橋試薬であるSPDPを用いて行った。まず、ね性細菌粒子表面を覆う有機薄膜に含まれるアミノ基とSPDPを反応させ、ピリジルジスルフィド基を導入させる。抗体はジチオスレイトールを用いて還元し、SH基を持たせた。このようにしてSH基を持たせた抗体と磁性細菌粒子との間にジスルフィド結合を形成させ、抗体固定化磁性細菌粒子を作製した。次に作製した抗体固定化ね性細菌粒子を用いて、IgGの分離及び検出について検討した。抗体固定化磁性細菌粒子をIgG溶液(0-10^2pg/ml)にまぜ、37℃、1時間反応させ磁石により磁気分離し、抗原抗体反応によって結合したIgGの回収を行った。さらに二次抗体であるアルカリフォスファターゼ(AP)によって酵素標識した抗IgG抗体を抗体固定化磁性細菌粒子に反応したIgGとまぜ、37℃、1時間反応させ磁気的分離の後、発光基質としてLumi-Phos530(Lumigen Inc製)を加えた。その後ルミネッセンスリーダーBLR-301(アロカ株式会社製)によって発光強度が安定したところで測定しIgG濃度の検出を行った。まず、二次抗体の濃度を6μg/mlの濃度で反応を行ったところ、IgG濃度と発光強度の間に相関関係が得られ、1pg/mlの濃度までIgGの濃度を検出することが可能であることが示された。

This year's study focused on the separation and identification of highly sensitive IgG antibodies and the immobilization of primary antibodies and the construction of secondary antibodies. Immobilization of magnetic bacterial particles and anti-IgG antibodies, two-way bridging assay for SPDP The surface of the bacterial particles is coated with organic thin films containing organic groups and SPDP. The antibody is not available. The antibody and the magnetic bacterial particles are bound to each other and immobilized on the antibody. The next step is to prepare antibody immobilized bacterial particles, IgG isolation and detection. Antibody immobilized magnetic bacterial particles IgG solution (0-10^2pg/ml), 37℃, 1 time reaction time magnet separation, antigen antibody reaction time binding IgG recovery The secondary antibody is labeled with enzyme and immobilized with IgG antibody. The antibody is immobilized on magnetic bacterial particles. After separation of IgG antibody at 37℃ for 1 hour, the luminescent substrate Lumi-Phos530(manufactured by Lumigen Inc.) is added. The light emission intensity of BLR-301(manufactured by Aero Co., Ltd.) is stable and the IgG concentration is measured. The correlation between IgG concentration and luminescence intensity was obtained at the concentration of 6μg/ml of secondary antibody and IgG concentration at the concentration of 1pg/ml.