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抗体固定化磁性細菌粒子によるアレルゲンの認識および除去

抗体固定化磁性细菌颗粒识别和去除过敏原

基本信息

批准号：
02205035
负责人：
松永是
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アレルギ-反応を利用したアレルゲンの検出には皮膚テストやRIST法が行われている。しかしながら、アナフィラキシ-ショックなどの危険を伴うことやその処理について問題があることから新しいアレルゲン検出法の開発が望まれている。また、アレルゲンの除去はアレルギ-反応の予防や治療のためには必要であるが、これまでにこの問題についてはほとんど行われていなかった。そこで本研究では磁性細菌がその菌体内に合成する有機薄膜に覆われた磁気微粒子(磁性細菌粒子)に直接、抗体イムノグロブリンE(1gE)の固定化を行い、抗体固定化磁性細菌粒子を調製し、アレルゲンの検出および除去について検討した。まず、磁性細菌粒子の大量調製のため磁性細菌の大量培養について行ったところ、炭素源としてコハク酸、窒素源として硝酸ナトリウムを用いpHスタットの条件で2.0x10^9cells/mlまで磁性細菌を増やすことができた。このとき、磁性細菌の収量は乾燥菌体の重量の2.5%までに達した。この磁性細菌粒子には蛍光色素FITCで標識したIgE抗体が粒子1mg当り324μg固定化可能であり、有機薄膜を取り除いた磁性細菌粒子と比べて非常に多量の抗体が固定化できることが示された。この抗体固定化磁性細菌粒子を用いてモデルアレルゲンであるDNPーBSA(ジニトロフェニル化した牛血清アルブミン)の検出について検討した。15分間反応させた後、ゼラチンを1%含む緩衝液(pH8.3)中に分散させ蛍光強度を測定した結果、蛍光はアレルゲンであるDNPーBSAとインキュベ-トした場合にのみ減少が見られた。さらに蛍光強度の減少とアレルゲンの濃度(0.1〜10μg/ml)との間に高い相関関係が得られた。このようにIgE抗体固定化磁性細菌粒子にアレルゲン認識能が確認され、高い選択能を示しことから、この粒子を利用したアレルゲン検出システムの作製とアレルゲン除去装置の試作について今後行う予定である。

The RIST method is used to detect and detect the presence of the virus. The development of the law is expected to be completed in the future. The problem is that it is necessary to prevent and treat the disease. In this study, the preparation, detection and removal of magnetic particles immobilized with antibodies were studied. Mass culture of magnetic bacteria, magnetic bacteria particles, carbon source, acid source, nitric acid source, pH 2.0x10^9 cells/ml, magnetic bacteria growth, carbon source, nitric acid source, pH 2.0x10^9 cells/ml. The amount of magnetic bacteria reached 2.5% by weight of dried bacteria. The magnetic bacterial particles were labeled with FITC and the IgE antibody particles were immobilized in 1mg at 324μg. The magnetic bacterial particles were removed from the organic film and the antibody was immobilized in a very large amount. This antibody immobilized magnetic bacterial particle was used in the detection of DNP BSA(bovine serum). After 15 minutes of reaction, the dispersion in 1% buffer solution (pH 8.3) was determined. The results showed that the concentration of DNP BSA decreased in the following cases. A high correlation was found between the decrease of fluorescence intensity and the concentration (0.1 ~ 10μg/ml) of fluorescence. The IgE antibody immobilized magnetic bacterial particles can be identified, high selectivity can be demonstrated, and the particles can be used to determine the future operation of the removal device.