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抗体固定化磁性細菌粒子による抗原の認識および分離

抗体固定化磁性细菌颗粒的抗原识别和分离

基本信息

批准号：
01604530
负责人：
松永是
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

走磁性細菌は、その菌体内にマグネタイトの磁気微粒子を常温・常圧の温和な条件下で合成する。この磁性細微粒子は粒子経約100mmで単磁区構造を取り、周囲は一様に有機薄膜によって覆われているため、分散性に優れている。すでに申請者らは、この磁性細菌粒子へ酵素や抗体の固定化を行い、人工の磁気微粒子に比べ固定化量が多いことを示した。この有機薄膜に覆われた磁性細菌粒子に抗体を固定化することにより、磁気誘導可能な分離・認識機能を有するハイブリッド材料を設計することができる。本研究は新しいハイブリッド材料としての抗体固定化磁性細菌粒子の作製を目的として、平成元年度は磁性細菌粒子を覆う有機薄膜のキャラクタリゼ-ション、抗体固定化磁性細菌粒子調製のための最適条件の検討、蛍光標識抗体固定化磁性細菌粒子を用いたフルオロイムノアッセイによるアレルゲンの検出などについて行った。磁性細胞粒子を覆う有機薄膜を分析したところ、主な成分として脂質、なかでもホスファチジルエタノ-ルアミンを多く含むことが明らかになった。次に、磁性細胞粒子をグルタルアルデヒドで処理した後、FITC標識抗マウスIgG抗体を固定化した。この調製した蛍光標識抗体固定化磁性細胞粒子が抗原抗体反応により凝集することで起こる蛍光強度の減少からアレルゲンを検出する原理のフルオロイムノアッセイを行った。上記の磁性細胞粒子とIgGのサンプルを混合し、37℃、15分間抗原抗体反応を行い、この試料をゼラチン1%を含む緩衝液に分散させ、蛍光分光光度計により、蛍光強度を測定した。反応時、外部より磁石を用いて、磁性細胞粒子を凝集させると、明らかに抗原抗体反応に基づく特異的な凝集反応が促進された。相対蛍光強度は5分後に50%、15分後にほぼ20%までに減少し、定常になった。以上のように、抗原抗体反応による凝集に基づく蛍光強度の減少から、アレルゲンの検出が可能であることが示された。

Magnetic particles can be synthesized under normal temperature and pressure in bacteria. The magnetic fine particles are about 100mm in diameter, and the structure of the single magnetic region is selected, the circumference is changed, and the organic thin film is coated and dispersed. The applicant indicated that the amount of immobilized enzyme and antibody in the magnetic particles was higher than that in the artificial magnetic particles. This organic film covers magnetic bacterial particles, immobilizing antibodies, magnetically inducing separation, recognizing functions, and designing materials. The purpose of this study is to investigate the preparation of antibody-immobilized magnetic bacterial particles with new materials and organic thin films, to investigate the optimum conditions for the preparation of antibody-immobilized magnetic bacterial particles, and to identify the use of antibody-immobilized magnetic bacterial particles by fluorescence. Magnetic cell particle coating organic thin film analysis, the main component of the lipid, the main component of the organic thin film coating Next, the magnetic cell particles were immobilized with FITC labeled IgG antibody. The modulation of antigen-antibody immobilized magnetic cell particles is based on the principle of light intensity reduction and aggregation. The above magnetic cell particles and IgG support were mixed, and the antigen-antibody reaction was carried out at 37℃ for 15 minutes. The sample was dispersed in a 1% aqueous buffer, and the fluorescence intensity was measured by fluorescence spectrophotometry. Antigen, antibody, and base specific agglutination reactions are promoted by magnetic cell particles. The relative light intensity decreases by 50% after 5 minutes, by 20% after 15 minutes, and by constant. The above results show that the antigen-antibody reaction can reduce the light intensity of the substrate.