糖鎖認識T細胞受容体遺伝子

碳水化合物识别T细胞受体基因

• 批准号: 06267203
• 负责人: 菅野 雅元
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06267203/
• 关键词: GM3ガングリオシド; 糖鎖認識; 妊娠; T細胞受容体遺伝子

[目的]これまで我々はマウス・メラノーマ抗原として機能しているGM3ガングリオシドを用いたリポソームを認識するT細胞による糖鎖認識のメカニズムを、分子レベルで解析してきた。平成6年度は、以下の計画のもとに実験を行った。(1)複数のGM3認識T細胞株からT細胞受容体遺伝子を単離し、そのcDNAの塩基配列を決定する。(2)GM3ガングリオシドは特に胎盤に多いことから、これを認識するT細胞集団は正常マウスでも胎盤に多いことが考えられた。つまりこのT細胞集団は、妊娠と何らかの相関があると考えられた。そこでGM3と妊娠の関係を理解するために、GM3認識T細胞の分化・生理的意義を調べる。そのために[結果・考察](1)GM3リポソームを認識するT細胞株を用いた解析はほぼ終了した。多くの細胞株を解析してもやはり均一なVα11Jα281/Vβ13が主であることが判明した。しかしin vitroのバイアスをかけないためにGM3リポソームと同時培養したマウスspleen細胞のT細胞受容体の解析を高感度な環状PCR法、または最近我々が開発した超高感度のPCR法を用いて現在解析を行っている。ちなみにこの方法は、1個の細胞からcDNAライブラリーを作成し得る感度を有している。(2)妊娠期間中の母親の末症血中に存在するVα11Jα281という再構成の際に生ずる環状DNAの量を測定した。コントロールとして同じJα281と異なるV(Vα4)との再構成の際に生ずる環状DNAを用いた。妊娠14-16日において一過性にVα11Jα281環状DNAのみが増加していることが観察された。つまり妊娠の中期から後期において一過性にGM3認識T細胞特異的な遺伝子再構成が起きていることがわかった。このことから、妊娠中期にGM3を認識するT細胞特異的な遺伝子再構成が胎盤でまず起き、4-5日後に末梢でも同じ再構成が起きることがわかった。(3)RT-PCRによりVα11Jα281CαのmRNAが特異的に増加していることが判明した。以上のことより、GM3を認識するVα11Jα281/Vβ13という均一な抗原リセプターを持つT細胞が妊娠の維持に関与しているのではないかと考えられるので、現在さらにこの点を追求している。このような抗原(GM3)/均一な抗原リセプター(Vα11Jα281/β13)/生理的意義(妊娠の継続)というシステムの樹立はほかに例がない。このシステムを用いることにより、糖鎖構造と生命現象は免疫学を介して解析できると考えられる。

[Objective] Therefore, we will use the GM3 gene library to provide a comprehensive tool to understand T cells 'sugar lock recognition and molecular information. In 2006, the following plans were implemented: (1)A plurality of GM3 recognized T cell lines and T cell receptor genes were isolated and their cDNA sequences were determined. (2) GM3 may be used to detect the presence or absence of T cells in the placenta. T-cell aggregation, pregnancy, and correlation This will allow us to understand the relationship between GM3 and pregnancy and adjust the significance of GM3 in understanding the differentiation and physiology of T cells. (1) GM3 protein analysis was performed on T cell lines. Many cell lines were analyzed and identified as Vα11Jα281/Vβ13. The analysis of T cell receptors by GM3 in vitro culture was carried out by high sensitivity loop PCR and high sensitivity PCR. The method is to create a single cell cDNA library with sensitivity. (2)The amount of cyclic DNA present in the mother's terminal blood during pregnancy was determined during re-formation. A circular DNA is produced when the DNA is reconstructed. During pregnancy 14-16 days, Vα11Jα281 cyclic DNA was detected. GM3 recognizes T cell-specific genetic recombination from the second trimester to the third trimester. GM3 is recognized in the second trimester of pregnancy, and T cell-specific gene recombination occurs in the placenta, and in the terminal after 4-5 days. (3)RT-PCR showed that Vα11Jα281Cα mRNA was increased in specificity. The above GM3 recognition is Vα11Jα281/Vβ13 and the antigen is uniform. The antigen is related to the maintenance of pregnancy by T cells. This antigen (GM3)/homogeneous antigen (Vα11Jα281/β13)/physiological significance (pregnancy) The structure of sugar chain and biological phenomena are analyzed in immunology.