胎児期造血幹細胞のストローマ細胞による増幅と分化能の変化

基质细胞对胎儿造血干细胞的扩增和分化潜力

• 批准号: 06277205
• 负责人: 生田 宏一
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06277205/
• 关键词: 造血幹細胞; 胎児胸腺器官培養; T細胞レセプター; RT-PCR; N配列

1 マウス胎生14日胎児肝臓および成体骨髄よりThy-1^<10>Lineage marker- Sca-1^+ c-kit^+である造血幹細胞をFACSを用いて単離した。単離した幹細胞をストローマ細胞株AC11と共に培養し、購入した倒立型顕微鏡にて経過を観察した。2 一定期間培養後、脾コロニー法、CFU-T(oc)法およびCFU-T(it)法にて幹細胞活性やT前駆細胞活性を測定した。以上の幹細胞活性を胎児期と成体期の幹細胞の間で比較した。その結果、胎児期の幹細胞は培養後2〜8週間にてCFU-S活性が増加したが、成体期の幹細胞を培養したものではCFU-S活性が増加することがなかった。このことは、胎児期の幹細胞は成体期のものよりも自己再生能が高いことを示唆している。3 培養した幹細胞を胎児胸腺器官培養にてT細胞に分化させた。RT-PCRによりT細胞レセプター遺伝子の増幅を行った。購入したブロックインキュベータ-にてDNAを調整し、各PCR増幅について20〜30クローンのN配列を決定した。幹細胞の培養期間によってN配列挿入の度合いが変化するかどうかを解析した。その結果、V_<γ4>遺伝子の場合3週間の培養でN配列挿入の割合が25%から61%に増加した。また、V_<β8>遺伝子の場合には42%から70%に増加した。以上のことは、胎児期の幹細胞がin vitro培養により胎児型から成体型に変化したことを示している。

1. Fetal 14-day-old fetal liver and adult bone. Thy-1^<10>Lineage marker- Sca-1^+ c-kit^+ Hematopoietic stem cells. Cell line AC11 was isolated and observed under microscope. 2. Stem cell activity and T lymphocyte activity were measured by spleen cell culture, CFU-T(oc) method and CFU-T(it) method after a certain period of culture. These stem cell activities are compared between fetal and adult stem cells. The results showed that CFU-S activity increased in fetal and adult stem cells 2 to 8 weeks after culture. Stem cells in fetal and adult stages have high regenerative capacity. 3. Stem cell culture and differentiation of T cells in fetal thymus organ culture RT-PCR is used to detect the increase in the amplitude of T cell DNA. The DNA of each PCR is adjusted and the amplification of each PCR is determined from 20 to 30 years. Stem cells are cultured for a period of time, and the sequence of stem cells is analyzed. In the case of V &lt;γ4&gt;, the number of N-aligned hybrids increased from 25% to 61% during 3 weeks of culture. V &lt;β8&gt; increased from 42% to 70%. These stem cells were cultured in vitro and transformed into embryonic stem cells.