リンパ球の分化過程におけるIL-7レセプターの発現制御機構

淋巴细胞分化过程中IL-7受体表达的调控

• 批准号: 04F04225
• 负责人: 生田 宏一
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04225/
• 关键词: サイトカイン; T細胞抗原受容体; シグナル伝達; 転写因子; T細胞

T細胞では、正と負の選択がおこる胸腺のDP段階と抗原特異的なクローン増幅がおこる末梢の活性化T細胞の2つの分化段階で、IL-7Rの発現が一時的に低下する。いずれもTCRの親和性のみで細胞の生死が決まる段階であり、余計な生存・増殖シグナルを入れる可能性のあるIL-7Rを積極的にシャットオフしていると考えられる。したがって、IL-7Rの発現制御はリンパ球の発生・分化過程で重要な役割を果たしている。本研究の目的は、IL-7Rα鎖遺伝子の転写誘導機構とTCRシグナルによるその抑制機構を解析し、リンパ球の生成・分化過程におけるIL-7Rの発現制御の意義を明らかにすることにある。まず、TCR刺激による末梢T細胞のIL-7Rα鎖の発現の変化を解析した。固相化抗CD3抗体でマウス脾臓T細胞をin vitroで刺激すると、刺激前にはIL-7Rα鎖が高レベルで発現していたものが、刺激後16時間で完全に消失した。次に、IL-7Rα鎖のmRNA量を解析した結果、刺激後1時間で半減し、16時間でほぼ消失した。さらに、この低下は、TCRの下流シグナル分子P38の阻害剤SB203580の添加によってブロックされた。これらの結果から、TCRの下流シグナル分子p38によってIL-7Rα鎖遺伝子の転写が抑制されることが明らかとなった。次に、IL-7Rα鎖の転写誘導機構を解析した。まず、プロモーター領域にはIkaros、Runx、Etsなど転写因子の結合モチーフが保存されており、この内Etsの結合モチーフが転写誘導に重要であることを、レポーター法とゲルシフト法で確認した。さらに、プロモーターから3kb上流のヒトとマウスの間で高度に保存されている領域にグルココルチコイド受容体のモチーフが存在し、グルココルチコイド依存的な転写誘導に必要なことを確認した。

在T细胞中，在两个分化阶段，IL-7R表达暂时降低：胸腺的DP阶段，其中发生了阳性和阴性选择，以及发生抗原特异性克隆扩增的外围活化的T细胞。在这两种情况下，细胞的生命和死亡都仅取决于TCR的亲和力，并且认为细胞会积极关闭IL-7R，这可能会导致不必要的生存和增殖信号。因此，IL-7R表达的调节在淋巴细胞的发育和分化中起重要作用。这项研究的目的是分析IL-7Rα链基因的转录诱导机制及其通过TCR信号传导的抑制机制，并阐明在淋巴细胞产生和分化过程中IL-7R表达调节的重要性。首先，我们分析了由于TCR刺激而导致外周T细胞中IL-7Rα链表达的变化。当用固定的抗CD3抗体在体外刺激小鼠脾脏T细胞时，刺激前表达了高水平的IL-7Rα链，但刺激后16小时完全消失。接下来，分析了IL-7Rα链中的mRNA量，并发现该含量在刺激后1小时减半，几乎在16小时消失。此外，通过添加SB203580（TCR的下游信号分子p38的抑制剂）添加了这种还原。这些结果表明，TCR的下游信号分子p38抑制IL-7Rα链基因的转录。接下来，分析了IL-7Rα链的转录诱导机理。首先，启动子区域包含用于转录因子（例如Ikaros，Runx和ETS）的结合基序，而Reporter方法和凝胶移位方法证实了ETS的结合基序对于转录诱导很重要。此外，我们证实了糖皮质激素受体的基序存在于启动子上游3 kb的人类和小鼠之间的高度保守区域中，这对于糖皮质激素依赖性转录诱导是必不可少的。